细胞色素p450酶的抑制、时间依赖性抑制和诱导模型-化学工程专业论文.docx

复旦大学硕士毕业论文细胞色素P450酶的抑制、时间依赖性抑制和诱导模型?摘要细胞色素氧化酶P450是人体内一类参与内源性和外源性化合物代谢的重要代谢酶，代谢活化许多药物，前致癌物，前毒物等等。大约有60%的药物主要依赖细胞色素氧化酶P450的代谢作用清除的。本文主要建立了细胞色素P450酶的抑制，时间依赖性抑制和诱导的模型，有望为研究新药提供参考。建立化合物对细胞色素P450 酶的抑制的模型时，我们选择了a-萘黄酮，磺胺甲，奥美拉唑，奎尼丁，酮康唑分别作为1A2，2C9 ,2C19，2D6,3A4 酶的抑制剂。化合物、底物和酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸在人肝微粒体的体系中进行反应，通过LC-M S 来测定代谢产物。通过此模型，我们可以直接从LC-M S 测定的代谢产物的多少来确定未知的化合物是否对细胞色素 CYP450 有抑制作用。由实验得知，a-萘黄酮，磺胺甲，奥美拉唑，奎尼丁，酮康唑对1A2,2C9，2C19,2D6，3A4 的抑制能力很强，IC50 分别是0.0061pM ’0.4025|^M ，4.7350nM ’0.0363faM，0.0122)aM 。其结果与文献值相媲美，结果表明模型建立成功。建立化合物对细胞色素P450酶时间依赖性的模型时，我们选用了呋拉茶碱，替尼酸，噻氯匹定，帕罗西汀，米非司酮分别作为1A2，2C9,2C19,2D6，3A4酶的抑制剂。化合物对细胞色素P450酶时间依赖性又分为两部分，一为单点模型，可求出时间依赖性抑制值(TDI);二为多点模型，可根据实验得出KI和Kinact(药代动力学上的重要参数）。此模型既可以在人肝微粒体中进行，也可以在重组酶中进行。化合物，酶在加入NADPH 或者没加NAD PH体系中首先进行反应，孵化一段时间后，把反应了一段时间混合溶液与含有底物和NADPH的溶液按照1:10的比例混合，化合物与酶的活性位点结合，底物加入后，与化合物共同参与竞争酶的活性位点，通过LC-M S来从测定代谢产物。在单点模型中呋拉茶碱，替尼酸，噻氯匹定，帕罗西汀，米非司酮对1A2，2C9,2C19，2D6,3A4酶的时间依赖性抑制（TDI)分别为90%，80%，54%,60%,和54%。在多点模型中，我们也成功的得出了KI和Kinact值。建立化合物对细胞色素P450 酶的诱导的模型时，我们选择了3-甲基胆蒽和氟美松分别作为1A2和3A4 酶的诱导剂。此模型使用肝细胞来建立的，化合物加入到细胞培养液中，通过LC-MS 来从测定代谢产物的变化。通过此模型，我们可以直接从LC-M S 测定的代谢产物的多少来确定未知的化合物是否对细胞色素CYP450 是否有诱导作用。由实验得知，3-甲基胆蒽和氟美松对1A2 和3A4 的诱3复旦大学硕士毕业论文导能力很强，高达200。关键词：细胞色素P450酶抑制时间依赖性抑制诱导中图分类号：R94复旦大学硕士毕业论文A b stractAsasignificantrolein endo-and exo-genouscompound metabolism，theCytochromeP450takespartinmetabolicactivationofvariantdrugs，precarcinogens,prepoisonsand deletionofvariantdrugs.CYP450inhibitionwasevaluatedinvitrothroughfivem ajorcytochrom eP450(CYP)enzym es fora-N aphthoflavon,Sulfaphenazole,Om eperazole,Quinidine,and?Ketoconazole in screen modes.The assayswere conducted in pooled human livermicrosomes(HLM)afterincubationofthetestcompoundsintheCYPenzymesaddedintotheanotherincubation systemscontainingknow nsubstratesandthecofactor.CYPenzymeactivitiesweredeterminedbased on metaboliteproductionquantifiedbyLC/MS/MS.TheIC50ofa-Naphthoflavon，Sulfaphenazole,Omeperazole,Quinidine,and KetoconazoleinHLM was0.0061^iMon CYP1A2，0.4025(aM on CYP2C9,0.0363|aM on CY