应用线粒体序列对几种海参的初步鉴定及其在海参深加工产品上的应用-水产品加工与贮藏专业论文.docx

应用线粒体序列对几种海参的初步鉴定 及其在海参深加工产品上的应用‘ 摘要海参在分类上属于棘皮动物门中现存的六个纲之一的海参纲。海参纲根据海 参的形态特征如：触手的形状、管足和呼吸树的有无分为6个目。而在科的水平上， 其分类的主要依据是埋没于外皮之下的微小的石灰质骨片，其中海参咽部的钙质 骨板(石灰环)的形态在海参分类上很重要。在种的水平上，其形态上的差别较小， 对海参进行种的水平上的区分没有非常精确有效的方法。对于已被加工过的海参 产品则更缺乏科学的鉴定方法，需要寻找一种简便准确的方法对加工后的海参进行鉴定。。‘。采用聚合酶链式反应(PCR)对日本刺参、大连参、日本关西参、北海道 刺参、俄罗斯红参、乌枣身、红海参、自肛海地瓜、红腹海参、小梅花参、黑海 参的线粒体CO I序列进行了扩增，电泳检测在690bp左右得到了清晰的扩增条 带，PCR产物纯化后与T载体连接，进行克隆、测序，分别得到了691-692bp之间 的碱基序列，这7个种类海参的COI片段的碱基组成差别都不大，GC含量分布在 40．0％-44．696之间。用MEGA软件检测到，以日本刺参为参照数据，白肛海地瓜、 黑海参、红腹海参、红海参、乌枣参、小梅花参变异位点比较多，其中小梅花参 变异位点最多，有124个变异位点。而日本刺参、北海道刺参、大连参、俄罗斯 红参和关西参变异位点很少，在692bp中只有18个变异位点；白肛海地瓜、黑海 参、红腹海参、小梅花参与其他海参的遗传距离都较大，分别约为0．196—0．212、 0．197—0．225、0．196—0．243、0．179-0．213，红海参约0．095-0．229，其他海参问 仅为0．003—0．012之间；通过计算不同个体间的遗传距离构建NJ树和ME树，在NJ 树和ME树中，都可以看到两个分支：俄罗斯红红参、日本刺参、关西参、北海道 刺参、大连参、乌枣参和红海参、白肛海地瓜为一支，其他的海参为一支。采用聚合酶链式反应(PCR)对日本刺参、大连参、日本关西参、菲律宾刺 参、俄罗斯红参、乌枣身、红海参、自肛海地瓜、蛇海参、北极参、靴参的线粒 体16Sr序列进行了扩增，电泳检测在330bp左右得到了清晰的扩增条带，PCR产物 纯化后与T载体连接，进行克隆、测序，7个种类海参的16Sr片段的碱基组成差别不大，长度分布在330—334bp，只有北极参和蛇海参分别是320bp和310bp。GC含 量分布在39．4％-48．1％之间，白肛海地瓜、蛇海参、北极参、菲律宾参变异位点 比较多，而日本刺参、大连参、俄罗斯红参和关西参、乌枣参和靴参变异位点很 少，且变异位点基本一致，关西参的变异位点相对较多，其中俄罗斯红参只有一 个变异位点，大连参有四个变异位点；白肛海地瓜、北极参、蛇海参、菲律宾参 与其他海参的遗传距离都较大，分别约为0．150-0．291、0．140-0．282、 0．140—0．277、0．194—0．291，大连参，日本刺参，关西参和俄罗斯红参遗传距离 很小；在NJ树和ME树中，都可以看到两个分支：俄罗斯红参、日本刺参、关西参、 大连参、乌枣参、靴参和红海参、白肛海地瓜为一支，其他的海参为一支。采用异丙醇与乙酸钠沉淀的改良方法从海参营养液中提取海参的DNA，通 过CO I引物进行PCR扩增，扩增产物纯化后与T载体进行连接，通过克隆、测序， 与已测定的海参序列及Blast进行比对，确认其中所含海参为青岛刺参。二干海参及海参产品中CO I和16Sr片段的成功扩增，再次表明了两种引物在棘皮类动物中的良好通用性，本实验对海参种类进行准确鉴定，有助于对海参种 类鉴定、遗传变异及系统演化的进一步研究，对规范海参市场也有重要意义。 关键词：海参；线粒体；鉴定；C0 I；1 6SrPrimary Study of Identification of Several Sea Cucumbers Based on Mitochondrial DNA Sequences andItsApplication on productionsAbstract啊豫sea cucumbers，class Holothuroidea,constitute one of the six extant classes of the exclusively marine phylum Echinodermata．The approximately 1200 speciesof sea cucumbers ale partitioned into six orders． Sea cucumber orders aredistinguished on the basis of gross morphological characters such as th