目的观察微生物的生长取线练习分光光度及操作与稀释使用涂.docVIP

目的：觀察微生物的生長取線、練習分光光度及操作與稀釋、使用塗碟觀察微生物菌落數。 原理：測定微生物生長曲線的方法是將待研究之微生物於密閉環境下，供給一定的營養物質，並給予最適當的溫度、PH極需氧條件中進行培養，微生物於此條件下逐漸生長，其生長狀況可利用微生物菌數的增加與時間之關係，繪出微生物生長曲線，搭配塗碟法觀察微生物的菌落數。 過程方法：秤2g的葡萄糖和0.1g的酵母菌，取100ml的培養液。 0分鐘：在100ml的培養水加入酵母菌，測吸光值後取1ml的菌液，加入培養水9ml，之後兩個混合再取1ml，加入培養水9ml，之後兩個混合再取1ml，加入培養水9ml，之後兩個混合再取1ml，加入培養水9ml，稀釋至10-4倍作塗碟。 15分鐘：加入葡萄糖，放入恆溫培養箱中(具震盪功能)震盪15分鐘後取出，測吸光值後再加入培養水稀釋至10-4倍作塗碟。 30、45、60、75分鐘：再放入恆溫培養箱(具震盪功能)，震盪15分鐘取出，測吸光值後再加入培養水稀釋至10-4倍作塗碟。 材料：錐形瓶、量筒、玻璃培養皿、三角彎棒、吸球、定量玻璃吸管、稱藥杓、酒精燈、稱藥紙、標籤、燒杯。 結果： 時間 吸光值 菌落數*10-5 原液菌數 (個/ml) 生菌數(CFU/ml) 0 1.4608 54 5.4*106 0.545 15 1.4804 298 2.97*107 2.98 30 1.4749 110 1.1*107 1.1 45 1.4596 50 5*106 0.5 60 1.4501 31 3.1*106 0.31 75 1.4486 21 2.1*106 0.21 0分鐘 15分鐘 30分鐘 45分鐘 60分鐘 75分鐘 -問題- 說明各組實驗結果(包括數據與圖形)之生長曲線進行至哪一期?此圖形有何意義? Ans：1.由圖型看出,生長曲線0~15分經過了遲滯期、對數期已經開始進入穩定 期了，在15~30分時由穩定期進入死滅期,30分以後皆為死滅期。 2.圖中看出菌種的生長週，由對數期快速上升可推測培養液中0.1g的酵母 菌的生長情形；此環境對酵母菌的繁殖力非常有利，使它生長快速。 說明各組生長曲線的適應期有多長?為什麼此一時期的吸光值都沒有顯著增加?若此時期所得的吸光度值成不規則的上下跳動，應如何解釋? Ans：1.這次實驗酵母菌反應速度很快，在15分鐘觀察時就已經錯過了遲滯期， 所以此菌液的適應期小於15分鐘。 2.微生物在適應環境中，吸收養分合成了新細胞，以備繁殖，僅細胞大小 增加，因此吸光值沒有明顯的改變。 3.可能是因為細胞大小忽增大影響了光的吸收、折射，導致此時的吸光值 成不規則上下跳動，不是因為菌數增加而改變。 測定微生物的生長曲線在微生物學上有何意義? Ans：包括微生物細胞的增大或增重以及整個微生物族群的增加。瞭解微生物的 生長情形、生理特性與培養特徵。 說明分光光度計的測定原理與實驗步驟。 Ans：1.原理是將微生物菌體視為懸浮膠體，當光通過菌液，這些微生物膠體會 吸收光或使光折射，使穿過菌液的光線強度減弱，造成光線強度的差異。 2.實驗步驟是將分光光度計設定波長550nm，並熱機10分鐘使讀職穩定， 清洗光電比色管，將預測物注入光電比色管內後，將光電比色管四周用 拭鏡紙擦拭乾淨，放入分光光度計，即可測量出吸光值。 討論：這個實驗我們做了酵母菌塗碟法和利用吸光值測定微生物的生長曲線，過程中0～15秒時，我們並沒有把含菌液的培養基之錐形瓶放入震動的地方，我們放在恆溫培養箱上面的櫃子中，可能是還沒均勻混合，或者是我們操作時間過長，導致菌液中的微生物死亡，以致菌落數漸漸變少。