基因诊断与基因治疗-副本.pptVIP

（一）治疗性基因的获得 在了解疾病发生的分子机制基础上， 选择对疾病有治疗作用的特定基因。 治疗性基因获得的方法很多： 用酶切或探针杂交法从基因组DNA文库获得，从cDNA文库获取，PCR扩增，人工合成等。 （二）基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移 入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体， 腺病毒载体，腺相关病毒载体等； 非病毒载体：与病毒载体的主要区别在于：采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。 （三）靶细胞的选择 基因治疗的受体细胞有生殖细胞和体细胞两大类。 对生殖细胞进行基因治疗，可使该生殖细胞分化发育成长的个体及其后代均具有正常基因，理论上讲是根治遗传病的理想方法。 但由于涉及安全性和伦理学问题，目前基因治疗中禁止使用生殖细胞作为靶细胞，只限于使用体细胞。 人类基因治疗中，将治疗基因导入靶细胞有两种 途径。 一种为直接体内疗法（in vivo）： 即，将治疗基因直接导入体内有关组织细胞； 另一种为间接体内疗法（ex vivo）： 即，在体外先将治疗基因导入培养的靶细胞内，再将已获得表达外源基因的遗传修饰细胞回输入病人体内，达到治疗目的。 治疗基因 导入受体细 胞的方法 化学方法 物理方法 膜融合法 病毒载体法 质粒DNA直接转移法 （四）基因转移方法 磷酸钙法 DEAE－葡聚糖法 电穿孔法 粒子轰击法（基因枪法） ( 五 ) 转导细胞的选择鉴定 标记基因技术 基因缺陷型受体细胞技术 基因共转染技术 分子杂交技术 外源基因表达鉴定 ( 六 ) 回输体内 将治疗性基因修饰的细胞以不同方式回输体内。 基因治疗的应用与展望 (一)基因治疗应满足的条件： 3、靶细胞易获取、培养、及回输体内。 2、仅限体细胞的基因治疗 1、单基因缺陷疾病 4、治疗效果应胜过对病人的危害。 5、表达水平无需调控且无副作用。 6、需经动物实验验证安全可行。 （二）基因治疗有待解决的问题 1、难以获得真正有治疗作用的基因。 2、外源基因的表达难以在体内精确调控。 3、体细胞经体外培养后，其生物学特性会有改变。 4、过多的外源蛋白对机体带来可能的影响。 5、随机整合潜在的威胁。 谢 谢 ！ 基因诊断与 ×× 基因治疗 基因诊断与 蔡运 基因治疗 基因诊断 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及其表达水平是否异常，从而对疾病做出诊断的方法。 基因治疗 基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。 基因诊断的特点 针对性强 灵敏性高 特异性强 检测样品获取方便 适应性强 基因诊断常用的技术方法 一 六 四 二 核酸分子杂交 DNA芯片 限制性内切核酸酶酶谱分析 聚合酶链反应 三 五 单链构多态性检(SSCP) DNA序列测定 Southern印迹杂交 Northern 印迹杂交法 提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→转移至膜→探针（标记DNA或RNA）与之杂交→显影或显色→检测信号。 Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA PCR产物变性后， 经聚丙烯酰胺凝胶电泳， 正常基因和变异基因的迁移位置不同， 可分析确定致病基因的存在。 PCR/单链构象多态性分析（SSCP） 过程原理 基因治疗的策略 一 基因置换 二 基因添加 三 基因干预 四 自杀基因治疗 五 基因免疫治疗 一、基因置换 二、基因添加 三、基因干预 四、自杀基因治疗 五、基因免疫治疗 体细胞基因治疗 基因治疗的两种方式 生殖细胞基因治疗 1只限于某一体细胞的基因的改变 2只限于某个体的当代 1对缺陷的生殖细胞进行矫正 2当代及子代 存在的一些问题 1对特定座位基因转移，目前还存在较大困难； 2随机插入可能引起后代的基因突变。 体细胞基因治疗 1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性展； 2）基因转移效率不高，只