第二十五章 药物生物转化 生物制药工艺学.pptVIP

第二十五章 药物生物转化 第一节 微生物转化反应概述 第二节 生物转化的类型 第三节 微生物转化在药物生产中的应用 微生物转化与药物生产 研究始于1864年巴斯德利用乙酸杆菌将乙醇氧化为乙酸, 工业化的里程碑是50年代美国普强药厂的Murray和Peterson利用微生物黑根霉(Rhizonpus nigricans)的羟化酶将黄体酮转化为11α-羟基黄体酮,即对甾体化合物的结构改造. 利用微生物的作用来进行某种化学反应称为微生物转化反应(microbial transformation or microbial bioconversion). 第一章 微生物转化方法 微生物转化是通过微生物细胞将复杂的底物进行结构修饰，也就是利用微生物谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物特定部位(基团)进行的催化反应。 微生物作为一个生命体，其体积虽小，但有一套自身特异性的酶体系。在它的生长过程中有无数酶的参与，合成酶、水解酶、异构酶、氧化酶、还原酶等都可能对加入其中的底物发生作用，使其结构发生变化。 正因为微生物有着这独特的优点，微生物转化就具备了生物量积累快、转化时间短、转化酶表达效率高、便于工业化生产的特点。 生物转化：是指外来化合物在体内、细胞内或酶的作用下经过一些列的化学变化形成期衍生物或分解产物的过程，也称代谢转化。 生物转化是利用微生物细胞的一种或多种酶，作用于一些化合物的特定部位（基团），使它转变成结构相类似但具有更大经济价值的化合物的生化反应。 微生物转化历史悠久，早在2500年前的春秋战国时期，人们就已经知道制酱和醋。在宋代，采用老的曲子进行接种，还根据酸大米和明矾水在较高温下培养制造红曲。不过当时人们并没有认识到可以利用微生物来合成化学物质。 微生物转化的一般过程 微生物转化实验概要过程如下： 选择需要的菌株 培养成熟菌丝或孢子 选择合适的转化方式 转化培养或转化菌丝及孢子悬浮液转化 转化液的分离提取 产品纯化 1．选择菌种 选择好的菌种是做好微生物转化反应的关键；根据微生物转化反应的类型，选择哪类微生物含这类反应的酶。一般可以向国家或地方保管菌种机构去函索取。 2. 制备培养基 按微生物转化菌种的培养特征和转化反应需要配制培养基；一般要求培养基的成分能使菌丝生长丰满和富含需要的酶。 3 加转他底物 加底物时有两个同等重要的影响因素：选择合适的菌种生长期加底物；选择加底物的方法和方式。 4 添加刺激剂或抑制剂 添加抑制剂是抑制酶副反应或抑制其他反应不良酶的生长；添加刺激剂是提高酶活力和增加酶生长量。 5 控制好转化反应培养时间 按有关微生物转化反应各种因素，控制好转化反应培养终点电，使底物转化达到最大反应完全值。 6 调控好影响因素 调控好整个转化过程中各项影响因素。 7 控制好转化反应终点 当取样分析反映转化培养液中转化产物积累不再增加时，立刻采用物理方法将菌丝体及培养物除去来停止转化反应。 8 分离纯化转化产物 此时转化产物已与生物转化系统分开，可按化学方法将产物分离提纯 微生物转化的影响因素 利用微生物代谢过程中某一个酶或一组酶系对底物进行催化反应，称为微生物转化反应。 微生物转化反应本质上是一个酶反应，因此，同酶反应一样，在这个催化反应过程中涉及一系列的影响因素，其中最为重要的是转化的时间、温度、底物添加方法、酶的抑制剂、酶的诱导剂以及生长调节剂等。 上述因素的变化皆会对转化率有一定的影响。下面分别针对上述因素对微生物转化的影响加以具体叙述 一、转化的时间和温度 微生物转化反应本质上是酶反应，是单酶或多酶的催化反应。 既然是酶反应，就存在一个最佳的反应时间，时间太短则转化不完全；时间太长，会造成微生物衰亡及酶失活。 最佳反应时间的确定可以采用高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、薄层扫描(TLCS)、分光光度法等定量分析手段来完成。 不同的反应类型、不同的微生物、不同的酶，最佳反应时间不同，有的只需几小时，有的则持续数天 温度也是影响转化率的一个重要因素。 温度升高，转化率会提高，但超过一定的限度，会使得酶失活速率也加快，所以只有在一个适当的温度下转化，才能达到最佳转化率。 最佳温度的选择也可通过上述分析检测手段来确定 二、底物添加方法 在微生物转化中，根据能否溶于水来分，可以把底物分为两大类，即可溶于水和不可溶于水底物。 能溶于水的底物添加方法中有许多是与培养基中添加碳源的方法相类似，但是其转化率与其添加方法有很大的影响。 对于能溶于水的底物来说，将其添加到水的培养基中进行微生物转化是比较容易的，不过要注意加底物量的多少、添加