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放射免疫技术 李双庆 放射免疫技术 一、前言 原理：放射性核素标记＋抗原-抗体反应 （探测灵敏度高、精度好） （识别特异强） 分类：RIA、IRMA； RRA、RBA； 二、放射性核素 125碘（125I）、氚（3H） 125I 131I 3H 射线 γ γ β 理化性 活泼 活泼 差 核素丰度 90% 20% － T1/2 60.2d 8.1d 12.3y 标记方法 简单 简单 复杂 标记设备 低廉 低廉 昂贵 测量条件 简单 简单 复杂 三、标记物制备、鉴定（125I） 1. 标记、标记物： 原理：125I-经氧化成 125I2或125I＋、取代反应置换酪氨酸或酪胺残基苯环（酚羟基邻位）的氢原子。 类型 直接法：氯胺T（Ch-T）、乳过氧化物酶（LPO）； 间接法：Bolton-Hunter试剂； 2. 标记物的纯化 过滤、层析、电泳； 四、标记物鉴定 放射化学纯度：定义、三氯醋酸沉淀，95％； 比放射性：定义、nCi/ng、Ci/mmol; a.高比放：减少用量，提高灵敏度； 易致免疫活性受损； b.测定方法： 计算法：结果歉准，简便； 自身置换法：准，测定复杂； 免疫活性：定义、过量抗体结合实验，90％； 原则：标记/非标记Ag具相同免疫活性 Ag*免疫活性下降原因： 标记：多碘标记（单碘最好）； 碘化位置靠近抗原抗原决定簇； 氧化损伤； 碘源中杂质； 储存：放射衰变、脱碘； 蛋白质变性、分解、聚合； 辐射自损伤； 实验：介质、pH； 试剂、样品中蛋白酶； 反应温度、时间； NSB：越低越好； 升高原因： Ag*变性、降解、聚合； 五、抗血清鉴定 亲和力（affinity）：抗原决定蔟与抗体结合部位间的结合力大小。 亲和常数（K): Ab-Ag的特征性常数；109L/mol; 对特定抗原：同一抗血清（多克隆）在不同稀释度K可变（主导抗体群不同） 解离常数（Kd)：1/K mol/L; 特异性：抗体识别抗原决定蔟的能力。 检测：交叉反应率 标准曲线 交叉反应曲线： Ag*、Ab（同上）； Ag（交叉反应物）； 交叉反应率＝（受检Ag的ED50/交叉Ag的ED50）x100% 滴度：反映抗血清中抗体容量； 结合50％标记物的抗血清稀释度 越高越好：干扰小，主导抗体；经济（1/万） 检测方法：抗体稀释曲线 放射免疫分析 一、基本原理：竞争结合/竞争抑制 反应参数：B/T=b(%) 结合率（以T为准）； F/T=f(%) 游离率 B/F 结合/游离 B/B0 结合率（以B0为准） 反应参数反映系统中所用抗原在结合/游离两种 状态间的分布； 二、实验方法 1.抗原、抗体反应： 标准品系列：Ag(已知，递增） 受检品系列：Ag(未知） 温育反应：温度、时间； 2.B/F分 要求：B/F分离完全； 不影响A