重组干扰素-α 生物制药工艺学.pptVIP

重组干扰素-α 干扰素（IFN)简介 干扰素是由多种细胞产生的一组蛋白质类细胞因子，具有广泛的抗病毒，抗肿瘤免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。根据其来源、分子结构和抗原性的差异分为α,β,γ,ω四个类型。α型干扰素又依其结构的不同再分为α-1b, α-2a, α-2b等亚型，其具体表现在个别氨基酸的差异上。我们要具体讲讲rhIFN α-2b的生产工艺设计。 IFNα-2b简介 IFNα-2b是苏黎世大学Charles Weissmann实验室最新发现的抗病毒药物，由Biogen公司发展的，最终由Schering-Plough公司出品，商品名为Intron-A。它应用于多种适应症，包括病毒性感染和肿瘤。它被批准用于乙、丙型肝炎、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、滤泡性淋巴瘤、良性肿瘤和恶性黑色素瘤的治疗等的治疗。 来源于维基百科 理化性质： 分子量：19247 结构特点：四个Cys残基，形成两个二硫键 无糖基化位点 PI:5-6 在PH2.5的溶液中稳定，对热也稳定 对各种蛋白酶敏感，比活为2X10^8 IU/mg 制备工艺路线： 制备工艺过程 基因的制备 构建重组质粒 酵母转化 发酵及表达产物的SDS分析 样品的纯化 样品的纯化 α * PPT制作：朱宇婷、张芳芳 资料查找：陈雪梅、方琦璐、钱媛媛、夏烽、董敏健、袁海剑 演讲：谢思思 发酵及表达产物的SDS分析 构建干扰素酵母工程菌后，-80℃保存菌种； 发酵前接种平板使菌种活化； 挑取单菌落于液体YPD+Zeocin 100mg/ml培养基中，300r/min、30℃培养至OD600为1.5， 取1ml稀释至100ml同样培养基中振荡培养至OD600 6—8、7000r/min、4℃离心15分钟，取上清液，经硫胺盐析浓缩、透析，用无菌水5ml溶解后以12.5%的分离胶做SDS分析。 CM-Sepharose Phenyl-Sepharose 0.4mol/L NaCL洗脱，加硫酸铵至30% 培养 0.1mol/l Nacl洗脱 Sephacryl S-200 发酵 离心收集上清 醋酸调PH4.0-5.0 冷冻干燥得纯品 生物活性鉴定