多维色谱讲义.pptxVIP

§6-9多维色谱multi-dimensional chromatography多维色谱与二维液相色谱的概念及原理多维液相色谱的分类二维液相色谱二维液相柱色谱的影响因素多维高效液相色谱的联用类型多维液相色谱的应用近十年来，色谱填料粒径的降低以及固定相表面理化特性的改进极大地提高了液相色谱柱的分辨能力。单一组分的色谱峰显现为多组分的重叠峰形状。Giddings指出，用一维分离方法对含有100个随机分布组分的样品进行分离，完全分离82个组分就需要有大约四百万的理论塔片数。单纯从液相色谱柱技术的改进和设计出发不足以对复杂样品体系中随机峰组分进行完全分离。理论上一个系统中所能分离出最多的样品组分数被称为峰容量(peak capacity)。多维技术比一维技术能提供更大的峰容量，因而多维技术更适合于复杂样品的分析。多维色谱(multi-dimensional chromatography，MDC)，即将样品在第一根色谱柱的洗脱液依次注入后续的色谱柱进行分离的色谱柱联用技术。多维色谱技术可以根据样品组分的性质差别，选择具有最大分离效果的几种色谱分离模式组合(反相色谱、离子交换色谱、分子排阻色谱、亲和色谱或者毛细管电泳等)，对样品进行分离。这种技术自20世纪90年代初出现以来，已得到很大发展，深受生命科学、食品卫生以及环保等领域的重视。将不同类型的色谱或同一类型不同分离模式的色谱连接在一起，成为多维色谱（multi-dimensional chromatography）。多维液相色谱在不同的分离阶段采用不同的分离模式，而分离阶段的数目多少被称为维度(dimentionality)。多维色谱属于色谱-色谱联用技术，是分离复杂样品的有效手段。将样品注入呈正交分布的多个分离体系中，样品中各组分以进样点为原点在多维的分离方向上展开。多维色谱在不同的分离阶段采用不同的分离模式，分离阶段的数目称为维数。维数依据所连接的分离模式的数目可以是二、三或更多。因此，多维色谱提供了比一维色谱更广泛的分离空间，允许组分峰沿着各分离维的坐标方向展开，从而减少了峰重叠。最早由Giddings提出，两条标准：(a)样品组份必须经过两种或两种以上的不同分离模式；(b)各组份间的分离不受后续分离的影响。二维液相色谱(2D一LC)是多维色谱中最常用的一种。分离机理不同而又相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离系统。样品经过第一维色谱柱分离后进入切换接口中，通过接口的富集、浓缩以及切割后进入第二维色谱柱继续分离。二维液相色谱通常采用两种不同的机理分离分析样品，即利用样品的不同性质如分子量、等电点、亲水性、特殊分子间作用(亲和)等把复杂混合物分成单一组分。用于构建二维系统的每一种模式的分离机理要尽量不同，即要求分离的正交性。完全正交的二维系统，理论上系统的分辨率是对应每一种一维模式分辨率平方和的平方根.峰容量是对应每一种一维模式峰容量的乘积。在一维系统中不能完全分离的组分，有可能在二维系统中得到较好的分离，因此整个二维系统的分离能力提高，系统分辨率、峰容量也增加。§6-9多维色谱multi-dimensional chromatography多维色谱与二维液相色谱的概念及原理多维液相色谱的分类二维液相色谱二维液相柱色谱的影响因素多维高效液相色谱的联用类型多维液相色谱的应用根据导入分析柱的洗脱液的不同部位可将分割形式分为前端分割（front cut）、中心分割（heart cut）和终端分割（end cut）根据对进样样品中完成情况进行划分可以把多维液相色谱技术分为部分模式和整体模式。部分模式部分模式是指将第一维洗脱馏分中感兴趣的部分注入后续维进行分离，即中心切割法(heart cutting)。中心切割法并不能得到样品的全部组分信息，不利于对未知样品组分进行操作。为了判断感兴趣组分的切割时机，还需要在各个分离模式下测量单一组分标准品的保留时间，增大了工作量。部分模式多用于样品的前处理步骤，或与亲和色谱柱偶联的二维系统。整体模式整体模式即全多维液相色谱(comprehensive MDLC)，是对注入第一维色谱柱的全部样品或者是能够代表所有组分的部分样品进行后续维的分离。全多维液相色谱能得到全部组分的保留信息，可以对复杂体系中的未知样品进行分析。在采用分流技术的二维系统中，虽然只有部分样品进入第二维系统中，但是只要这部分样品能代表全部样品组分的信息，也属于全二维系统的范畴。根据对进样样品分析的连续性分为离线和在线多维色谱两类。离线多维色谱可分为多柱色谱及多模式色谱两类。多柱色谱是指在不同的色谱柱上分别进行保留机制不同的分离，它往往需要一系列不连续的操作步骤以及对样品进行人工处理，包括进样、代测组分的定位和收集，以及不断对收集到的组分进行预处理。它的特点是简单、应用普遍，但是费力耗时