红细胞免疫检测与临床应用的研究新进展.ppt

此实验做为科研方法深入研究各种免疫性疾病的免疫学发病机理更有价值。该试验的成功也证明红细胞按免疫功能状况不同，可分为亚群，结合Coomb`s试验使用可能更有价值。在资料不断积累过程中会进一步开拓该试验的实用价值，对自身免疫溶血性贫血发病机理新的解释会进一步深化。 * （三） 血清中红细胞免疫调节因子活性的测定 1．原理 血清中存在促进与抑制红细胞免疫功能的两种物质，即红细胞免疫促进因子（RFER）与抑制因子（RFIR），前者耐热（58℃30min不被灭活），后者不耐热（58℃30min灭活）而设计红细胞C3b受体花环促进与抑制试验。 * 2．方法学 郭峰等法 促进与抑制试验两种方法可同时操作：取三支试管，第一、二支试管加入待测新鲜血清各0.075ml。第一管放58℃水浴30min。第二管放室温，第三管加入0.075ml生理盐水；然后每管再加入洗过3次的正常人0型红细胞悬液（1.25×107／ml）0.05Inl混匀，放 37.℃水浴 30min；再加补体致敏酵母菌悬液（1×108／ml）0.05ml混匀，放 37℃水浴30min，加 7滴生理盐水混匀，再加 2滴 0.25％戊二醛混匀． * 从各管中取出约 1／3细胞悬液水平涂片、吹干，加甲醇固定后，用瑞氏液染色。红细胞呈红色，酵母菌呈兰色。血清灭活管涂片高倍镜下计数二种花环标准，一种是红细胞结上 2个或 2个以上酵母菌为一朵花环（计算促进率使用）；一种是结上3个或3个以上酵母菌为一朵花环（计算抑制率使用）。 * 血清未灭活管涂片高倍镜计数，红细胞结上三个或三个以上酵母菌为一朵花环（计算抑制率使用）。生理盐水管涂片高倍镜计数，红细胞结上2个或2个以上酵母菌为一朵花环。每管涂片都计数200个红细胞，按各自标准，算出花环率。按不同公式求出促进率与抑制率，以此标准代表血清中红细胞免疫促进因子和红细胞免疫抑制因子活性。 * 58℃灭活血清组花环率 RBC—C3bRR抑制率（RFER） = 58℃灭活血清组花环率—未灭活血清组花环率 RBC—C3bRR促进率（RFER） 58℃灭活血清组花环率—生理盐水组花环率 生理盐水组花环率 = * 刘景田等法：一步法红细胞免疫调节因子测定 1．材料 1.1补体致敏Ys酵母冻干试剂：按说明书要求溶解、洗涤，配制浓度为1×108／ml 1.2电子血细胞计数仪：山东三联电子公司产品，型号DXJ—2。 1.3生物显微镜：日本产，型号CH—B145－T。 1.4电热恒温水浴锅：江苏省张家港医疗器械厂，型号HH.S。 1.5标本来源：为临床确诊的住院患者，其中食道癌24例，胃癌12例，肝癌9例，肺癌6例，膀胱癌11例。 * 2．方法与结果 2.l 改郭峰原方法的两步法为一步法 按郭峰原法处理血清，分别加入灭活管（58℃30min）和未灭活管（室温）各0.075ml，第三管加入生理盐水0.075ml，然后依次加人洗过三次的正常人O型RBC悬液1.25×107/ml），和补体致敏Ys酵母菌悬液使用液(1×108／ml)各0.05ml混匀，置37℃水浴30min，其余步骤按郭峰法操作，并与郭峰原法对照，其结果如下： * 表2-1 一步法与两步法检测结果对比（X土s）％ 例数 两步法 一步法 P RFER REIR E/I 62 62 62 116.8±21.7 153.8±62 2.1±0.5 114.8±20.1 56.3±6.9 2.0±0.4 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 * 从上表可以看出，（1）用一步法对52例恶性肿瘤患者红细胞免疫调节因子的检测结果与两步法（原方法）检测结果基本相一致，二者无显著性差异（P＞0．05），说明将血清、O型 RBC和补体致敏 Ys酵母菌三者依次加人进行一次孵育与三者分别加入进行两次孵育所得结果是一样的，说明一步法是可行的，能够代替两步法。（2）恶性肿瘤患者血清中RFER明显下降（对照组 18.9±28.3），RFIR明显上升（对照组34.8± 4.6），与恶性肿瘤患者红细胞免疫功能低下是一致的。 * 血清中红细免疫促进因子与红细胞免疫抑制因子在血清中的含量，可用其RFER与RFIR的比值来表示，值的大小可反映血清中调节因子的变化规律，同时亦能间接反映红细胞的免疫功能。其比值愈大，血清中红细胞免疫促进因子含量愈高，其抑制因子含量愈低，红细胞免疫功能就愈强；反之，比值愈小，血清中红细胞免疫促进因子含量愈低，抑制因子含量愈高，红细胞免疫功能愈弱。上表中RFER／RFIR的比值明显减少（正常对照为5.7±1.2），与恶性肿瘤患者血清中红细胞免疫促进因子下降、抑制因子上升、红细胞免疫功能低下相一致。可见，测定患者血清中RFER与RFIR的比值在临床上有着重要意义。 * 2.2统一了阳性花环的判定标准，