盆底骨骼肌细胞受力前后的超微结构变化-妇产科学专业论文.docx

盆底骨骼肌细胞受力前后的超微结构变化中文摘要目 的应用Flexercell4000细胞加载系统对盆底骨骼肌细胞加载外力，阐明力加 载实验中加力时间和加力强度与细胞超微结构损伤的关系及细胞凋亡情况，探 讨盆底骨骼肌细胞机械性损伤前后α-肌动蛋白（α-actin）基因表达水平的变 化。方 法首先取腹会阴联合直肠癌根治术病人的盆底肛提肌组织，对其进行体外原 代培养、纯化和鉴定，取2-5代稳定的传代骨骼肌细胞，为后续加力实验提供物 质基础。然后采用Flexercell4000细胞加载系统对细胞加载外力，设置加力强 度分别为0、3%和6%，加力时间分别为6小时和24小时。最后收集细胞，借助透 射电子显微镜对加力前后骨骼肌细胞形态及其超微结构变化作出定性描述；应 用流式细胞技术检测骨骼肌细胞加力前后细胞的凋亡情况；通过实时定量荧光 PCR(RT-PCR)法来测定细胞受力前后α-肌动蛋白(α-actin)基因表达水平的变 化。结 果1. 通过透射电镜观察发现，盆底骨骼肌细胞在加力的条件下，细胞形态及 其内部超微结构会发生一系列适应性改变或损伤性变化，随着加力时间和加力 强度的增加，细胞损伤性变化更明显。在加力3% 6h的条件下，与未加力组相比， 细胞形态变化不大，随着加力强度和加力时间的延长，细胞的形态逐渐破碎， 排列方式紊乱，细胞膜结构不清甚至消失，线粒体肿胀变圆，嵴变短甚至消失， 细胞核内陷、固缩，异染色质增多，溶酶体增多。2. 流式细胞仪检测结果显示：加力组与未加力组相比，骨骼肌细胞的凋亡率 增加。在加力时间固定的条件下，加力强度6%下的细胞凋亡率比加力强度3%下的细胞凋亡率增加（F=44.742，P＜0.05），差异有统计学意义，表明随着加力强度的增加，骨骼肌细胞凋亡率增加；在加力强度固定的条件下，加力时间为24 小时的细胞凋亡率比加力时间为6小时的凋亡率增加（F=15.998，P＜0,05），差 异有统计学意义，表明随着加力时间的延长，细胞凋亡率增加。且加力时间和 加力强度存在着交互作用（F=3.575，P＜0.05），在加力时间24小时和加力强度 为6%的条件下，细胞凋亡率增加最明显。3. RT-PCR法检测结果示：加力组与未加力组相比，骨骼肌细胞的α-actin mRNA的表达水平下降，在加力时间固定的情况下，加力强度为6%的α-actin mRNA的表达水平比加力强度为3%的基因表达水平下降（F=90.743，P＜0.05）， 差异有统计学意义，表明随着加力强度的增加，细胞的α-actin mRNA的表达水平 随着下降。在加力强度固定的情况下，加力时间为24小时的α-actin mRNA的表达 水平比加力时间为6小时的基因表达水平下降（F=23.151，P＜0.05），表明随着 加力时间的延长，细胞α-actin mRNA的表达水平随着下降。且加力时间和加力强 度存在着交互作用（F=12.908，P＜0.05），在加力时间24小时和加力强度6%的 条件下，细胞的α-actin mRNA的表达水平下降最明显。结 论本实验发现盆底肛提肌细胞受到机械拉伸刺激后，细胞形态、超微结构及 骨架蛋白基因表达水平发生一系列改变，从而引起细胞功能的损伤、消失，可 能造成盆底组织松弛，支持能力减弱，从而导致 PFD 发生。通过对肛提肌细胞 的生物力学特性研究，有助于揭示肛提肌组织损伤在盆腔器官脱垂的发病机制。 关键词肛提肌细胞；机械拉伸；超微结构；α-肌动蛋白；RT-PCRUltrastructure change of skeletal muscle cell in pelvic floor induced by stressObjective:AbstractApply loading force on the pelvic floor skeletal muscle cells with Flexercell4000 cell loading system to clarify the relationship between loading time，loading tension and cell ultrastructure injury ， to clarify the change cell apoptosis rate, to discussalpha actin gene expression level changes through loading force on the pelvic floor skeletal muscle.Methods:First take levator muscle tissue from the patients with abdominal perineal j