用qpcr方法检测粗品肝素的动物来源.pdf

用qPCR方法检测 粗品肝素的动物来源粗品肝素的动物来源 美国SPL有限公司杭州代表处 毛兴昌 年99月月 电话：0571 1 方法开发的背景 国际厂商对粗品肝素来源的要求国际厂商对粗品肝素来源的要求 PCR检测动物源方法简介 qPCRqPCR方法开发设计方法开发设计 样品处理 方法设计与对照控制方法设计与对照控制 2 方法开发的背景 对粗品肝素钠来源的要求 为了预防疯牛病和羊痒病的传染为了预防疯牛病和羊痒病的传染，，国外厂商都不采购国外厂商都不采购 牛、山羊和绵羊来源的粗品肝素。 只采购猪来源的粗品肝素只采购猪来源的粗品肝素，，不得混有牛不得混有牛、、山羊山羊、、绵羊绵羊 来源的粗品肝素。 生产上对屠宰场生产上对屠宰场，，刮肠车间刮肠车间，，肠粘膜加工提取粗品肝肠粘膜加工提取粗品肝 素车间有一系列的要求。 对粗品肝素产品进行动物源检测对粗品肝素产品进行动物源检测。。 检测方法：粗品肝素中残存的动物基因DNA。 3 qPCR检测动物源方法简介 qPCR：实时荧光定量聚合酶链式反应。 粗品肝素含有微量动物基因DNA。 qPCRqPCR方法可以将微量方法可以将微量DNADNA以指数级扩增并被以指数级扩增并被 检测到。 qPCRqPCR方法可以检测到百万分之一以下的微量方法可以检测到百万分之一以下的微量 DNADNA。。 4 国外客户对动物来源检测的要求 粗品肝素不可含有反刍动物的DNA（低于 0.03ppm0.03ppm ））**。。 粗品肝素必须有一定量的猪的粗品肝素必须有一定量的猪的DNADNA，，以证明粗以证明粗 品肝素来源于猪。 正常粗品肝素应含有数百正常粗品肝素应含有数百ppmppm或更多猪的或更多猪的DNADNA。。 如检测不出猪的DNA或含量过低，该产品有被 化学处理的嫌疑化学处理的嫌疑。。 *注：ppm：百万分之一 5 qPCR基本原理 1 8 2 4 经过经过3030次扩增次扩增，，11个个DNADNA片段可变为几百万个片段可变为几百万个DNADNA片段片段。。 极微量的反刍动物DNA可被扩增和检测到。 6 qPCR方法的优点 给出猪和反刍动物的 DNADNA定量结果定量结果。。 定量下限可达0.03ppm， 为国外客户选用为标准为国外客户选用为标准 动物源检测方法。 操作步骤比普通PCR简 单，快速。 7 qPCR方法开发设计-样品处理 肝素钠对PCR有明显的抑制，用 肝素酶降解肝素钠方法可消除抑 制制。。 在不同浓度的粗