第六讲 抗生素质量控制幻灯片.pptVIP

⑧统计计算 与结果判定 供试品效价相当于标示 量或估计效价的百分数 θ= D㏒-1[ ( TH＋TL－SH－SL) ×I ) ×100 TH＋SH－TL－SL 计算出检品的效价 求出θ=D· log（IV/W） θ供试品和标准品的效价比 D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1 I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 应用示例 抗生素效价测定 标准品及供试品溶液的制备 双碟的制备 培养 滴装溶液 抑菌圈测量 误差统计分析 测定结果的计算 三、抗生素测定操作要求 1 防止抗生素污染 由于管碟法是微量的微生物分析法，故称量稀释除应满足用容量分析及仪器分析进行定量分析的一般要求外，还应注意效价测定试验室内防止抗生素污染。 微量的抗生素还可以附着在尘埃上，随着空气流动散落在双碟培养基平板，钢管，钢管放置器上，有时可能是使抑菌圈破裂的原因。因此，要避免将抗生素溶液滴在地上或工作台上，如被污染时应及时清洁。在配制培养基或缓冲液时，亦应严防被抗生素污染。 2 操作顺序安排上的误差　　在一剂量法制备标准曲线时，双碟数量较多，滴加抗生素溶液至钢管的时间，各个双碟的时间基本一致。如滴加8组稀释度双碟，可从中心浓度组开始向高，低二端交叉滴加。 可减少各组间抗生素扩散时间及试验菌生长时间的差异。尤以枯草杆菌在室温较高时，这种影响更为明显。 此外，标准品与供试品的称量，应在相近的时间内称取，稀释后的溶液尽量在相同的条件下放置，并使放置的时间也相同，以减少误差。 3 测量抑菌圈应避免误差　 测量抑菌圈是本法取得试验结果的重要环节，目前多已采用抑菌圈面积测量仪测量以克服使用游标卡尺容易产生的主观误差。 现国产抑菌圈面积测量仪主要有ZY-300IV型智能抑菌圈测量仪（由北京先驱威锋技术开发公司生产经销）和CHB－1型抗生素效价测量仪（北京海淀潮声技术开发公司开发）。且经微机处理，能自动打印出效价及生物统计分析数据。 Zone Analyzer 管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。 通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。 在一定的抗生素浓度范围内，对数浓度（剂量）与抑菌圈面积或直径成正比。 （一）管碟法测定原理 （二）管碟法的材料 类别 实验菌 培养基 PH 链、卡 庆、红 枯草芽胞杆菌 Ⅰ 7.8-8.0 四、土 氯、林 滕黄八叠球菌 Ⅱ 6.5-6.6 管碟法测定操作 1. 试验用菌液、缓冲液、培养基的制备 按规定进行制备。 2. 标准品与供试品溶液的制备 按药典规定制备标准品与供试品高低不同浓度溶液。 3. 双碟的制备 制备底层及含一定量试验菌的菌层，并安置小钢管。 4. 滴加药液到小钢管内 将标准品、供试品溶液滴入相应的小钢管中。 5. 培养 在恒温培养箱中培养至规定时间。 6. 测量抑菌圈 可用手工测量或仪器测量。 7. 计算结果 先进行可靠性测验,符合规定,再进行效价计算 ①培养基及 其制备方法 ②灭菌 缓冲溶液 ③菌 悬液 的制 备 ④标准品溶 液的制备 ⑤供试品溶 液的制备 ⑥双碟的制备 ⑦检定法 管碟法测定操作 抗生素效价检定管碟法操作流程 标准品的称量 →标准品的稀释→标准品溶液 缓冲液的制备 供试品的称量 →供试品的稀释→供试品溶液 --─┐ ┌───平板的制备────┐ 底层20 ml─→菌层5ml ─→ 培养基的制备→ 菌液的制备 加菌液 可靠性测验，计算结果 ←──测量抑菌圈←─培 　养 加小钢管 加陶瓦园盖 1. 试验用菌液 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20h到22h:临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用。 大肠杆菌悬液：取大肠杆菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37 ℃培养20h到22h:临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用。 细菌浓度：在试验之前，可以先做一个关于用不同浓度菌液配制的琼脂培养基菌层预试验，选择抑菌圈直径在18～22mm的菌液浓度为试验用浓度 （菌液浓度约为10 个/mL）。 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥加入剂