基因工程2011-2012.pptVIP

基因工程简介 生物工程 例：基因工程培育抗虫棉的简要过程 限制性内切酶 思考 “分子缝合针”—— DNA连接酶 基因的运载体 质粒 基因操作的基本步骤 1、目的基因的获取 直接分离法--鸟枪法： 用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。 人工合成法 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 2）化学合成法（根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ）： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 2、基因表达载体的构建——核心 目的： 单独的DNA片段──目的基因是不能稳定遗传的。构建表达载体的目的是为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能表达和发挥作用。 基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因 3、将目的基因导入受体细胞 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 4、目的基因的检测与鉴定 检测：（分子水平） ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因： 方法——DNA分子杂交 ②检测目的基因是否转录出了mRNA： 方法——分子杂交 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质： 方法——抗原——抗体杂交 （如果有，表示目的基因已经进行了翻译） DNA分子杂交技术 分子探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段（目的基因片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足条件： （1）必须是单链； （2）带有容易被检测出来的标记物（如放射性同位素标记）。 四、基因工程的应用 （一）、植物基因工程硕果累累 （二）、动物基因工程前景广阔含基因工程药品异军突起 （三）、基因治疗曙光初照 （四）、基因工程与环境保护 基因工程与医药卫生 基因工程与医药卫生 植物转基因技术流程示意图 基因工程的弊端 基因工程与环境保护 （二）、动物基因工程前景广阔 什么叫转基因动物？ 是指把人或哺乳动物的某种基因导入到哺乳动物(如鼠、兔、羊和猪)的受精卵里，目的基因若与受精卵染色体DNA整合，细胞分裂时，该基因随染色体的倍增而倍增，使每个细胞中都带有目的基因，使性状得以表达，并稳定地遗传给后代，从而获得基因产品。这样一种新的个体，称为转基因动物。 4.用转基因的动物生产药物 4.用转基因的动物生产药物 为什么乳腺能成为基因药物最理想的表达场所呢？ 1）乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体内循环，不会影响转基因动物本身的生理代谢反应。 2）从乳汁中获取目的基因产物，产量高，易提纯，表达的蛋白质已经过充分的修饰加工，具有稳定的生物活性。 3）从乳汁中源源不断获得目的基因的产物的同时，转基因动物又可无限繁殖。 （三）、基因治疗曙光初照 基因诊断：也称为DNA诊断或基因探针技术，即在DNA水平分析检测某一基因，从而对特定的疾病进行诊断。 探针制备：放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的DNA分子； 原理：利用DNA分子杂交原理；互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补配对进行。因此，当用一段已知基因的核苷酸序列作为探针，与被测基因进行接触，若两者的碱基完全配对成双链，则表明被测基因中含有已知的基因序列。 （三）、基因治疗曙光初照 基因诊断技术在什么方面发展迅速？ 在诊断遗传性疾病方面发展迅速。目前已经可以对几十种遗传病进行产前诊断。 举例 1）β—珠蛋白的DNA探针 → 镰刀状细胞贫血症 2）苯丙氨酸羧化酶基因探针 → 苯丙酮尿症 3）白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的DNA探针 → 白血病 （三）、基因治疗曙光初照 基因治疗：把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥作用，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的方法 实例：患半乳糖血症的患者，由于细胞内半乳糖苷转移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷转移酶，使过多的半乳糖在体内积聚，引起肝、脑等功能受损。1971年，美国科学家在体外做了试验，用带有半乳糖苷转移酶基因的噬菌体侵染患者的离体组织细胞，结果发现这些组织细胞能够利用半