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原位分子杂交 in situ hybridization,ISH 原位分子杂交（ISH ） 定义：是用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检 测体系，在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进 行定位和相对定量研究的一种手段，分为DNA、RNA 和染色体原位杂交三大类，是最直接的基因定位方法之 一，是分子生物学技术在基因定位中的应用。 原理：碱基的互补配对，同源的DNA-DNA双链或DNA- RNA双链在一定条件下能结合成双链。用放射性或非 放射性物质标记的DNA、RNA或与mRNA互补的cDNA 作探针，可检测细胞基因组中的同源部分。 分类：显色原位杂交和荧光原位杂交 荧光原位杂交(Fluorescence in situ Hybridization,FISH) 利用生物素或地高辛等非放射性物质标记探 针，并通过荧光素偶联的抗原-抗体检测系 统，在组织、细胞及染色体上对DNA或RNA 进行定性或定位分析。 直接法和间接法 标记物：脱氧尿嘧啶三磷酸 Bio-11-dUTP(生物素) Dig-11-dUTP(地高辛) Nucleic Acid Hybridization DNA RNA of complementary sequence “hybridize” Nucleic Acid Hybridization Assays Probe hybridization target Gene X Probe hybridization target RNA X Complimentary sequence hybridization specificity Her-2 FISH 结果 FISH是检测乳腺癌Her-2扩增的金标准 测 检 交 杂 位 原 光 荧 点 子 量H e r - 2 增 扩 的 因 基 Multicolor Detection FISH Applications Normal Cancerous (notice crossovers) Multicolour fluorescence is used in Flow Cytometry, DNA Sequencing, FISH, Fluorescence microscopy, etc. Human Papillomavirus DNA demonstrated by In Situ Hybridisation (pink) in epithelial cells identified by indirect immunofluorescence using antibody against cytokeratin (green) Multiplex FISH (MFISH) Image each and then overlay…how many? MFISH: How many genes detect