四、基因工程的操作过程汇.ppt

（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程 如果Ampr上插入外源DNA，导致氨苄青霉素抗性基因失活，可用碘-青霉素指示液选择。 2. 插入表达筛选法 将一段负调控序列重组到标记基因上游，用于抑制标记基因的表达。当外源DNA插入在负调控序列内使其失活位于下游的标记基因才能表达。 ?-半乳糖苷酶 乳糖 半乳糖 葡萄糖 Xgal 半乳糖 5-溴-4-氯靛蓝 + + 深蓝色 1. 原理： 载体上有一段?-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的?片段（氨基端），其上有外源DNA的插入位点。 受体菌基因组中有突变的?-半乳糖苷酶基因（ ?片段缺失）。可以被IPTG诱导表达。 载体和受体菌基因组可以互补形成完整有功能的?-半乳糖苷酶。 C. ?-半乳糖苷酶显色筛选 2. 选择过程 ?-半乳糖苷酶使Xgal分解成兰色产物。 利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择（只在特定条件下），要求克隆的基因片段至少是一个完整的基因序列，而且能在大肠杆菌中实现表达。 转化进来的外源基因产物能够弥补受体菌株的突变型缺陷。 1.弥补缺陷 his- his+ 受体菌： 外源基因： 在不含组氨酸的培养基中生长 二、利用插入序列提供的表型特征筛选 小鼠的二氢叶酸还原酶（DHFR）对三甲氧苄二氨嘧啶有抗性。 DHFR 载体 连接 转化受体菌 三甲氧苄二氨嘧啶培养基平板 含DHFR的克隆才能生长 例： 使被转化