基层兽医实验室开展禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验出现的误差分析与探讨.docVIP

基层兽医实验室开展禽流感血凝（HA） 和血凝抑制（HI）试验出现的误差分析与探讨 南金鱼 （酒泉市畜牧服务中心 甘肃 酒泉 735000） 酒泉市肃州区南环西路20号 摘要：禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验成为当前基层兽医实验室检测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。通过开展基层兽医实验室比对试验发现影响禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验的因素诸多，分析实验结果和关键操作步骤，总结试验误差，归纳出从试剂配制、器材准备和操作规范三方面改进完善试验。 关键词：禽流感；血凝抑制；结果误差；分析与探讨 禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流感血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验成为当前基层兽医实验室检（监）测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。 为探索试验操作技巧、提高实验结果准确性，我们对同1组（9份）血清在7个县级兽医实验室（实验室名称在下文分别以A、B、C、D、E、F、G代替）开展了抗体检测比对试验，发现在不同的实验室、不同的人员操作下出现不同的结果。根据此次比对试验，笔者对影响基层兽医实验室开展禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验结果准确性的因素进行了简单分析讨论，以供同行参考。 1.试验方法 1.1检测样品：血清样品1组（共9份，已知抗体滴度），根据实验需要将每份血清分成等量的若干小份（每小份不少于0.5ml）共50份，并重新编号后，随机组合成7组血清盲样（每组10份血清，其中有3-4份重复）（血清盲样分配见表一）。 1.2诊断试剂：同一生产批号的（哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号分别为200901和200801）禽流感H5(HI)标准抗原和标准阳性血清各7份（诊断试剂分配见表一）。 1.3材料准备： 1.3.1 96孔900和1100V型微量反应板和不同型号微量移液器数把（配有滴头），各实验室自行准备。 1.3.2阿氏（Alsevers）液、1%鸡红细胞悬液和pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS），各实验室均按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）中配制方法配置。 1.4检测步骤：按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）要求操作（具体步骤略）。 样品分组编号情况(表一) 样品编号 分组后盲样编号 A B C D E F G 1 7 5 1 1 10 1 2 1,5 10 8 8 3 2 6 3 2 4 7 8 9 4 8 4 5 9 7 5 1 9 3 6 6 8,10 10 7 1 7 9 3 6 2 1 5 8 3 2 4 6 7 10 9 4,6,7,9 3,5,6 1,2,6,7 2,9,10 4,5,8,10 3,5,9 2,3,4,8 标准抗原 1份 1份 1份 1份 1份 1份 1份 阳性血清 1份 1份 1份 1份 1份 1份 1份 合 计 12份 12份 12份 12份 12份 12份 12份 禽流感(HI)检测结果分析（表二） 样品编号 标准滴度 各实验室检测结果 检测次数 与标准滴度相比 A B C D E F G 相同滴度出现 低一滴度出现 高一滴度出现 出现其他结果 次数 比例 次数 比例 次数 比例 次数 比例 1 28 　 28 28 27 27 29 27 6 2 33% 3 50% 1 17% 0 0% 2 26 27 25 27 20 26 20 210 7 1 14% 1 14% 2 29% 3 43% 3 27 20 28 27 27 210 5 2 40% 0% 1 20% 2 40% 4 210 210 210 210 28 210 5 4 80% 0% 0% 1 20% 5 26 26 29 20 28 4 1 25% 0% 0% 3 75% 6 25 20 25 20 20 4 1 25% 0% 0% 3 75% 7 26 20 26 20 25 20 20 6 1 17% 1 17% 0% 4 67% 8 210 27 210 28 20 28 210 6 2 33% 0% 0% 4 67% 9 20 20 20 20