-学年高中生物浙科版（浙江专版）选修一教学案：第一章+实验二+分离以尿素为氮源的微生物+Word版含答案.docVIP

实验二分离以尿素为氮源的微生物 1．尿素 又称脲，是蛋白质降解的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。 2．以尿素为氮源的微生物的特点 含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。其利用尿素的反应式为： (NH2)2C＝O＋H2O脲酶,2NH3＋CO2。 3．分离以尿素为氮源的微生物 (1)实验原理： ①在以尿素为唯一氮源的选择培养基上生存的微生物能以尿素为氮源。 ②细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。 (2)培养基的对照：制备LB全营养培养基和尿素为唯一氮源的培养基，分别培养土壤中的微生物，并对菌落观察并计数。 (3)实验步骤： 1．分离以尿素为氮源的微生物所采用的分离方法是(　　) A．涂布分离法　　　　B．划线分离法 C．稀释分离法 D．选择分离法 解析：选A　微生物的分离方法多种多样，本实验使用了涂布分离法。 2．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比(　　) A．比实际值高 B．比实际值低 C．和实际值一致 D．比实际值可能高也可能低 解析：选B　培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，并且该方法测得的是活菌的菌落数目，未包括死菌数，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。 3．下列有关叙述，错误的是(　　) A．在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会导致培养基呈酸性 B．地表土壤中含有一定量的脲 C．以尿素为氮源的细菌含有脲酶 D．脲是一种有机化合物，含有氮元素 解析：选A　根据反应式：(NH2)2C＝O＋H2O2NH3＋CO2，在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会产生NH3，从而导致培养基呈碱性。 4．用以尿素为唯一氮源加入酚红指示剂的培养基，培养尿素分解菌后，指示剂将(　　) A．变蓝色 B．变红色 C．变黑色 D．变棕色 解析：选B　尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红色。 5．在细菌分解尿素的化学反应中，生成物中除CO2外还有(　　) A．N2 B．NO C．NO D．NH3 解析：选D　以尿素为氮源的微生物中含有脲酶，它能降解尿素并产生NH3，为其生长提供氮源，其反应如下：(NH2)2C===O＋H2O2NH3＋CO2。 1．筛选菌株的原理 (1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。 (2)方法： ①在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。 ②改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。 ③改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物；用普通培养基在无氧条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微生物。 [特别提醒]　能在选择培养基上生长的不一定是目的菌 原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。 2．统计菌落数目的方法 微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法，计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如下表所示： 项目 直接计数法 间接计数法 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 主要用具 显微镜、细菌计数板 培养基 计数数据 菌体本身 培养基上菌落数 优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌 缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差 [题组冲关] 1．下列有关尿素培养基的叙述，错误的是(　　) A．根据物理性质划分，该培养基属于固体培养基 B．培养基中的唯一氮源为尿素，用以筛选以尿素为氮源的微生物 C．培养基中的酚红，用以鉴别以尿素为氮源的微生物 D．培养基中加入G6玻璃漏斗过滤的尿素后，要用500 g/cm2压力(90℃以上)灭菌30 min 解析：选D　因为尿素加热会分解，所以应先将培养基经500 g/cm2压力灭菌30 min(为防止葡萄糖分解碳化)，再添加经过G6玻璃漏斗过滤后的尿素。 2．下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是(　　) A．利用涂布分离法既能分离微生物也能对微生物进行计数 B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散获得单个菌落 C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培