葡萄酒中柠檬酸检测超标了.docxVIP

葡萄酒中柠檬酸检测真的超标了？ 按：近年来，时不时有客户跟我们咨询柠檬酸的检测问题，我们一开始以为问题不复杂，也给出相关的解决方案（常规的应用方案），但总觉得客户似乎对我们的方案不是十分热情…… 最近，我们多方了解，发现客户的问题并不是简单的色谱问题，而是“葡萄酒中的柠檬酸检测”不合格率太高了，于是，我们按《GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法》标准方法进行研究，并确信找到了两项关键的影响因素，在尽量不偏离国标方法的原则下找到相应的解决方案，怀着激动的心情分享给我们所有的客户。 标准品溶液配制方法与色谱柱不匹配，标准品溶液峰面积变小，导致结果计算的时候样品中柠檬酸含量超标。 标准规定，用NaOH溶液配制标准溶液，使得标准溶液中的柠檬酸完全解离，进入色谱系统后，如果使用的色谱柱不匹配，柠檬酸分裂为两个峰。 解决方案1：用水作溶剂配置柠檬酸标准溶液 知名品牌A色谱柱 NaOH 配制标准溶液图谱 知名品牌A色谱柱 水配制标准溶液图谱 知名品牌B色谱柱 NaOH 配制标准溶液图谱 知名品牌B色谱柱 水配制标准溶液图谱 讨论：在国家标准《GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法》中，柠檬酸溶液的溶剂是NaOH溶液配制溶解的，从柠檬酸电离示意图可知，柠檬酸在碱性条件下被完全电离，进入色谱之前，样品溶液与酸性流动相接触混合（流动相：pH2.9 ），部分被迅速还原为柠檬酸分子状态，部分依然以离子形态存在，进入色谱柱后便被分裂成两个色谱峰，或严重的前沿峰，严重影响含量计算；换成水作为溶剂之后，柠檬酸峰型得到改善，不影响含量计算。事实上葡萄酒本身也是酸性溶液，换用水直接配制标准品溶液后，标准品溶液和样品溶液更一致，测定结果更准确。 解决方案2：选用匹配标准的色谱柱！太玮科技的HPLC应用实验室有各知名品牌数十种C18色谱柱，我们认为：既然是国家标准方法，是一定可以重现的！花了整整1周时间，我们筛选出一只最匹配的色谱柱——Aquasil C18 5μm 250×4.6mm色谱柱（订货号：11105-2546） 水配制标准溶液图谱 NaOH 配制标准溶液图谱 讨论：Aquasil C18 5μm 250×4.6mm色谱柱，按照《GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法》，标准品溶液峰形良好！但还是需要注意两点： 跟仪器的柱前管路有关系，通常柱前管路越长，峰形越对称！推荐使用ThermoFishe零死体积通用连接管：6040.2365 VIPER SST 0.18×450mm 由于样品溶液pH和标准品溶液pH相差太远，样品中柠檬酸峰的保留时间通常会稍长于标准溶液柠檬酸的保留时间，如果两者RDS≥2%，建议用水配制标准品溶液。 样品中其他成分与柠檬酸不能分离，导致样品中“柠檬酸”含量过高超标。以下实验结果是同一样品按《GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法》【柠檬酸检测】项下方法制备样品溶液，存放于同一样品瓶中分别于三支不同色谱柱检测的结果，见表1： 表1：UNDER THE SEA红酒样品（产地：智利）中的柠檬酸检测结果（用峰面积计算） 色谱柱柠檬酸保留时间柠檬酸峰面积柠檬酸峰高含量计算结果A C18 色谱柱8.9min3534330183.3ppmB C18 色谱柱8.7min6988242206.1ppmAquasil C186.9min2437621862.3ppm 讨论:葡萄酒样品中成分复杂，某些有机酸或氨基酸成分可能会包入柠檬酸峰里面，导致“柠檬酸峰”峰面积变大，含量测定结果偏高！Aquasil C18 色谱柱虽然也不能确保100%去除其他成分对柠檬酸测定的干扰，但根据以上结果，更有可能分离出更多的干扰成分。 知名品牌A色谱柱 知名品牌B色谱柱 Aquasil C18 色谱柱样品图谱 葡萄酒中柠檬酸检测完整解决方案 色谱柱：Aquasil C18 5μm 250×4.6mm（货号：11105-2546） 流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.9） 流速：1.0ml/min 检测波长：214nm 柱温：室温 进样体积：10μL 溶剂：水 葡萄酒中加入定量柠檬酸标准溶液 液相色谱图 关于Aquasil 在拉丁语中，AQUA=水。Aquasil C18色谱柱作为全球首支兼容100%水流动相的色谱柱，是“水性C18色谱柱”的定义者！Aquasil C18亲水性封端技术、独特的材料除了具备其他常规C18固定相的相似选择性外，还有以下优势： ·对酸性化合物，碱性化合物和中性化合物都有出色的峰型 ·对大极性化合物有很好的保留 ·100%的纯水流动相中能保持稳定 ·低浓度缓冲溶液中稳定 ·兼容LC/MS仪