实验十、微生物的生理生化反应 （二）.ppt

实验十一、微生物的生理生化反应 （二） 前言 在所有活细胞中存在的化学反应称之为代谢。微生物代谢重要特征之一就是类型的多样性，具体表现在生理生化反应的多样性。微生物的生理生化反应也被作为细菌鉴定和分类的内容。 前言 无论分解代谢还是合成代谢，代谢途径都是由一系列连续的酶促反应构成，某些微生物在代谢过程中除了产生其生命活动所必需的初级代谢产物和能量外，还会产生一些次级代谢产物，这些次级代谢产物除了有利于微生物的生存外，还与人类的生产与生活密切相关，也是微生物学的一个重要研究领域。 本次实验分别做： 1.微生物对生物大分子的分解利用（淀粉水解、明胶水解） 2.微生物对含碳化合物的分解利用（糖发酵、甲基红、VP） 3.微生物对含氮化合物的分解利用（吲哚试验） 来证明不同细菌生化功能的多样性。 一、大分子物质的水解试验 微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质降解才能被微生物吸收利用。 如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和多糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实：淀粉遇碘液会产生蓝色，细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色。 微生物利用各种蛋白质和氨基酸作为氮源，当缺乏糖类物质时，也可用其作为碳源和能源。 明胶是胶原蛋白经水解产生的蛋白质，有些微生物可产生明胶酶，水解明胶使其液化。 菌种： Bacillus subtilis 、 Escherichia coli 、 Staphylococcus aureus 、Pseudomonas aeruginosa 1.淀粉培养基 3皿/组 2.明胶培养基 3管/组 二、糖发酵试验 糖发酵试验在肠道细菌的鉴定上尤为重要。细菌分解糖类物质的能力有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体，有些细菌只产酸不产气。 发酵培养基中含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色变为黄色。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 菌种： Escherichia coli 、Proteus vularis 1.葡萄糖发酵培养基 3管/组 其中一管作对照 2.乳糖发酵培养基 2管/组 三、IMV试验 用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查： 1. 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。 2. 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。 3. VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。 菌种： Escherichia coli 、Enterobacter areogenes 1.葡萄糖蛋白胨水培养基（VP试验，甲基红试验） 4管/组 2.蛋白胨水培养基（吲哚试验） 2管/组 四、伊红美蓝试验 伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基，常用于检查乳品和饮用水中是否含有致病性的肠道菌。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。 菌种： Escherichia coli 、Enterobacter areogenes、 Bacillus subtilis 培养基：2皿/组 * *