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光学显微镜技术一 制片方法的种类 染色和染色剂 苏木素与伊红联合染色（HE染色）仍是目前最常用、最稳定也是最成功的一种方法。在组织学和临床病理学研究实践中应用广泛。 常见的基团 如硝基NO2、亚硝基、醌型苯环、偶氮基、偶氮氧基、乙烯基等。 最常见的助色团： 氨基、羟基、羧基、磺酸基、甲氨基和二甲氨基等。 染料的助色基团的性质可决定染料是酸性还是碱性。一般而论，酸性染料含酸性助色团（-OH、-COOH、-SO3H等），它与碱作用生成盐，在水中电离时使染料带负电。 （2）人工合成染料 此类染料种类很多，根据其化学结构（发色团）可分为以下几类： ④ 醌亚胺类染料 甲苯胺蓝、硫堇、美蓝、 中性红、天青石蓝、 硫酸尼罗蓝等； ⑤ 苯甲烷类染料 光绿、孔雀绿、酸性复红、 碱性复红、苯胺蓝、派罗宁Y、 伊红Y、吖啶黄 荧光染料系列等。 （2） 酸性染料 是一种色酸盐，通常是钠盐，也可为钾、钙或铵盐。它含有酸性助色团， 如羟基、羧基、磺酸盐。一般作为细胞浆染色剂，如伊红、亮绿等。  （3） 中性染料 是由酸性和碱性染料混合配制的复合染料，常用于涂片染色，如血液涂片染料姬姆萨染料。 ② 吸收或吸附 组织细胞中生物分子的引力作用，使色素粒子被吸附而染色。 而胞浆则含较多的碱性物质，易于酸性染料染色。由于改变染液的氢离子浓度，而使染色的一般规律发生变化，会发生异染色或过染现象。 诱发荧光是指物体照射前，先将可发荧光的染料（荧光素）结合到物体上，再进行紫外线照射并激发出荧光。这时荧光就出现在荧光素与物体结合的部位。 采用荧光染色是近些年来的一大潮流，特别是高灵敏度的光感仪器设备和信息技术介入形态学研究，荧光染色技术和生物荧光染料的研制和开发都发展很快。 一般荧光染料在200C时即开始发生温度猝灭作用，但随后温度再升高时则无明显变化。 如果荧光素浓度过大，荧光强度不仅不会随溶液的浓度增大而增加，反而出现强度下降的情况。 这是因为浓度增加后，分子间易发生碰撞，激发分子受碰撞影响，能量损耗大，不能产生荧光；另外，溶液浓度过大，会有一些缔合分子形成，也引起荧光强度的降低。 例如络合物的形成是依靠分子间的微弱范德华引力作用，则所形成的络合物不能发生荧光，而将所吸收的光能转化为热能。 主要的猝灭剂有： 某些金属离子，如铁离子、镁离子等； 某些具有氧化作用的物质，如没食子酸、硝基苯等。 某些染料若不应用媒染剂，则染色力很弱，经过媒染剂作用后，染色效果明显改善，这是因为媒染剂促进了染料分子与组织结构相结合。 封藏剂可分为湿性和干性两大类。 湿性封藏剂（如甘油、甘油明胶、Apathy糖浆等），使用范围较小，不易长期保存，主要用于免疫组织化学反应的材料，切片标本不须经过酒精和二甲苯的脱水、透明的情况。 (六) 媒染与促染剂  1 媒染剂 凡是自身能与染料或组织发生结合，促进染色能力和生成色淀的金属离子的盐称为媒染剂。所以凡是能与金属离子（过渡金属离子）作用生成色淀的染料，有时也称为媒染染料。 助色基团 染料除了应含发色团外，还需要有一种能使化合物发生电离作用的辅助基团，这就是助色团。助色团能使染料的颜色深度发生改变，并促进染料与被染物质具有亲合力，不决定是否显色，只帮助染料附着。即将不能染色的有色物质变为一种电解物，使染料与被染物质形成一种盐类化合物。 酸性染料和碱性染料的定义 区别染料酸碱性依据是看染料的主要基团是否为阳离子或阴离子，与染料溶液的PH反应无直接关系（如伊红Y能与碱金属钠离子形成盐，此钠离子就决定了溶液呈碱性反应）。 碱性染料含碱性助色团（-NH2、-NHCH3、-N（CH3）2、-N（C2H5）2等）， 它与酸作用生成盐，在水中电离时使染料带正电。 ???? 染料的分类 1 根据染料的来源分类： （1） 天然染料 是从动植物体内提取的染料，例如苏木素、胭脂红、卡红和靛青等。  ① 亚硝基染料 如萘酚绿-B； ② 硝基染料 如苦味酸；③ 偶氮染料 如甲基橙、油红、苏丹系列染料、桔黄-G等； 根据染料的化学反应分类 （1） 碱性染料 为一种色碱盐，大多数是氯化物、硫酸盐、醋酸盐类，含有碱性助色团氨基或二甲氨基。主要