第二章菌种的来源(009).pptVIP

第三章 菌种选育与培养 2. 材料的预处理 自然界中有目的微生物分离的原则 为了提高分离效率，设计了各种处理材料的方法。 通常采用热处理方法减少材料中的细菌数，这种作用的基础仍不清楚，但许多放线菌的繁殖体，孢子（如链霉菌）和菌丝片段（如红球菌）比G（－）细菌细胞耐热。加热虽然能减少细菌同放线菌的比例，但也常减少放线菌的数目。 1、施加选择压力的分离方法 富集液体培养 富集培养是指能增加混合菌群中所需菌株的数量的一种技术。方法的要领是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌株生长的条件。例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 固体培养基的使用 该方法常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有该酶的作用底物。 2、随机分离方法 抗生素产生菌的筛选 抗生素可作为分离步骤中的选择压力 生长因子产生菌的筛选 生长因子如氨基酸和核苷酸等的生产不能作为分离步骤中的选择压力，可用随机办法分离产生菌，并通过随后的筛选试验检验出产生菌。 多糖产生菌的筛选 可从菌落的粘稠外观识别这类产生菌。 第二节 工业微生物菌种的选育 用发酵法生产产品，首先要有一个良好的菌种，因此必须进行菌种选育工作 菌种选育工作大幅度提高了微生物发酵的产量，促进了微生物发酵工业的迅速发展 通过菌种选育，抗生素、氨基酸、维生素、药用酶等产物的发酵产量提高了几十倍、几百倍、甚至几千倍 菌种选育在提高产品质量、增加品种、改善工艺条件和产生菌的遗传学研究等方面也发挥了重大作用 菌种选育的目的是改良菌种的特性，使其符合工业生产的要求 第四节 工业微生物菌种保藏 一、自然选育 在生产过程中，不经过人工诱变处理，根据菌种的自发突变而进行菌种筛选的过程，叫做自然选育或自然分离。 引起自发突变的原因：多因素低剂量的诱变效应；互变异构效应。 自然选育包括从自然界分离获得菌株和根据菌种的自发突变进行筛选而获得菌种。 自然选育的方法与第一节介绍的微生物的分离方法相近，不同之处在于分离和筛选是同步进行的。 宇宙空间的各种短波辐射、自然界普遍存在的一些低浓度诱变物质、微生物自身代谢活动中产生的诱变物质。 四种碱基的酮基（酮式或烯醇式）和氨基（氨基式或亚氨基式）的互变异构。 1. 从自然界分离获得菌株 一般包括以下几个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定等。 2. 从自发突变体中获得菌株 变异是育种的基础。 自然突变是指自然条件下出现的基因变化。 自发突变的频率较低，因此自然选育筛选出来的菌种，不能满足育种工作的需要。因而不能仅停留在“选”种，还要进行“育”种。如通过诱变剂处理菌株，就可以大大提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，从中选出具有优良特性的变异菌株——诱变育种。 二、诱变选育 使用诱变剂进行人工诱变能提高突变频率和扩大变异谱，具有速度快、方法简便等优点，是当前菌种选育的一种主要方法，使用普遍。 诱发突变随机性大，必须与大规模的筛选工作相配合才能受到良好的效果。 诱变育种的主要环节： 以合适的诱变剂处理大量而均匀分散的微生物细胞悬浮液（细胞或孢子）以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中DNA碱基变异频率大幅度提高； 用合适的方法淘汰负效应变异株，选出极少数性能优良的正变异株，以达到培育优良菌株的目的。 出发菌株的选择 工业上用来进行诱变处理的菌株，称为出发菌株（parent strain）。 一般有三种： 从自然界分离得到的野生型菌株； 通过生产选育，即由自发突变经筛选获得的高产菌株； 已经诱变过的菌株。 菌悬液的制备 前培养 诱变 变异菌株的分离和筛选 1、诱变选育的程序 2、诱变育种方案设计 诱变育种方案包括突变的诱发、突变株的筛选和突变高产基因的表现。 这些环节是相互联系，缺一不可的。 （1）出发菌株的选择 选择纯种作为出发菌株，借以排除异核体或异质体的影响。 不仅选产量高的，还要考虑其他因素，如产孢子早而多，色素多或少，生长速度快等有利于合成发酵产物的特性。 选择对诱变剂敏感且变异幅度广的菌株作为出发菌株，可以提高变异频率，而且高产突变株的出现率也大。 （2）诱变剂的种类和选择 A、诱变剂 物理诱变剂 化学诱变剂 各种射线，如紫外线（焦耳）、X射线（库仑/千克）、β射线、γ射线、α射线和超声波等 甲基磺酸乙酯（EMS）、亚硝基胍、亚硝酸、氮芥等。 诱变处理剂量的选择是一个比较复杂的问题，一般正突变较多出现在偏低剂量中，而负突变则较多出现于偏高剂量中。 对于经过多次诱变而提高了产量的菌株，在较高剂量负突变率更高。 因此，目前处理剂量已从以前采用的死亡率90～99％减低为70～80％。 诱变剂的选择主要根据已经成功的经验，与诱变剂本身特点、菌种的种类和出发菌株的遗传背