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第八章 微生物的生长 微生物的生长(microbial growth)：在合适的外界环境条件下，微生物个体或群体细胞中主要化学组分的协调而平衡的增长。 微生物的繁殖(microbial reproduction)：微生物生长到一定阶段，细胞结构复制与重建，并通过特定方式产生新个体的生物学过程。 微生物生长可分成个体生长与群体生长。 个体生长(individual growth)：单个细胞的成分不可逆和按比例的增加。 群体生长(population growth)：单位时间内细胞数量或细胞质量的增加。 第一节 微生物的生长条件 一、营养物质 二、温度 原核生物对温度的适应表现为多样性。 嗜温菌 嗜冷菌 嗜热菌 三、pH 细菌 6.5-7.5 真菌 4.5-6.5 放线菌 7.0-8.0 根据与氧的关系，微生物可分成五种类型 二、微生物生长的测定 2、间接计数法 3、细胞生物量法 湿重法 干重法 蛋白质含量法 DNA含量法 代谢测定法 第二节 细菌的群体生长繁殖 分批培养法(batch culture)： 将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，让其自然生长直到养分耗尽，并随时测定细菌数目，可以发现细菌的群体生长有一定的规律。 一、群体生长规律 （一）迟缓期 / 延滞期 （lag phase） 将少量微生物接种到新鲜培养基中，在开始培养的一段时间内细胞数目维持恒定，或增加很少的时期。 特点：1、生长速率常数等于零； 2、细胞形态变大或增长； 3、细胞内RNA尤其是rRNA含量增高； 4、合成代谢活跃； 5、对外界不良条件反应敏感。 （二）对数生长期 （log phase） 或称指数生长期(exponential phase) 紧接着迟缓期的，细胞以几何级数速度分裂的一段时期。 特点： 1. 生长速率常数最大，因而细胞每分裂一次所间隔的时间最短； 2. 细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀； 3. 酶系活跃、代谢旺盛。 （三）稳定期 （stationary phase） 特点： 1. 生长速率常数等于零，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等的动态平衡之中； 2. 菌体生长量达到最高； 3. 开始形成贮藏物，形成芽孢，合成代谢产物。 （四）衰亡期 （decline/death phase） 特点： 1. 细胞个体死亡的速度超过新生的速度，整个群体呈现负生长； 2. 细胞形态多样，会产生一些不规则的退化形态； 3. 有的微生物因蛋白水解酶活力的增加而发生自溶； 4. 释放代谢产物； 5. 释放芽孢。 二、生长的数学模型 Nt=N02n 细菌繁殖的世代数(n) lgNt = lgN0 + lg2n lgNt - lgN0 = nlg2 n = [lgNt - lgN0]/[lg2] n = 3.32[lgNt - lgN0] k = n/t = (3.32[lgNt - lgN0])/t growth rate (k) 三、同步培养(synchronized culture) 同步生长：通过同步培养的方法，使群体细胞中每个个体细胞在生活周期中都处于相同的生长阶段，并同时进行分裂的生长方式。 （二）同步培养方法 1．机械方法 2．环境条件控制技术 四、连续培养(continuous culture) 连续培养：在一个开放的系统内，以一定的速度连续供给新鲜培养基的同时，将含有微生物和代谢产物的培养液以相同的速度放出，从而使液量维持恒定，使培养物在近似恒定的状态下生长及代谢。 恒浊连续培养 turbidostat G=(t1-t0)/n= (t1-t0)/3.322 (lgNt-lgN0) 代时(G)：细菌在指数期每分裂一次所需要的时间。 Monod 1942年 枯草杆菌在葡萄糖和阿拉伯糖的培养基中出现二次生长现象（biphasic bacterial growth） （一）同步生长 (synchronized growth) 怎样获得同步生长的细胞？ 不同生长阶段的细胞，其沉降系数不同。 区带离心法 硝酸纤维素滤膜吸附细胞，翻转滤膜，连续缓慢加入新的营养液，细胞生长，新产生的细胞洗脱。 过滤法 膜洗脱法 温度诱导法： 低温 最适温度 培养基成分控制法：限制性营养培养基 正常培养基 * * 各细胞组分按恰当的比例增长，达到一定程度后就发生繁殖，从而引起个体数目的增加。原有的个体发展成一个群体。 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖