实验十、微生物的分离与纯化.pptVIP

实验十、微生物的分离与纯化（一） 一、目的要求 1.学习并掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本技术。 2.练习微生物接种、培养的基本技术，掌握无菌操作技术 二、原理 土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 实验材料 样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 三、步骤： 微生物的分离技术 取出上次准备的培养基（三角瓶），灭菌的培养皿、吸管、试管。 a.平板稀释分离法：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，待测菌样品 1.先前准备好的1ml无菌吸管,9cm无菌平板，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。2.称取1ml菌液加入无菌水中用吸管来回吹吸数次也可将三角瓶置摇床上振荡2分钟，让菌体分散。3.取9cm无菌平板6套，用记号笔在平板底编号, 写上姓名、学号。 4.用1支1ml的无菌吸管,取稀释菌液0.1ml放入平板中,如此将两个重复做完.同法取稀释菌液放入相关平板中 (均要按无菌操作法做)。 6.将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后加入抑制性化合物10ml，冷却至45-50℃后,在酒精灯火焰边按无菌操作法倒入上述6套平板中,每个加入量大约15-20ml,边加边摇动平板,使培养基与菌液充分混匀。7.待培养基凝固后,放置10分钟，将平板倒过来,置培养箱中28-30℃下培养后观察。 Viable count-plate counting （微生物的分离—平板涂布法） 实验十一、微生物的分离与纯化（二） 一、目的要求 1.学习并掌握倒平板的方法和划线分离纯化微生物的基本技术。 2.掌握无菌操作技术、培养的基本技术 二、原理 四大类微生物菌落的识别 细菌菌落的识别 酵母菌的菌落 霉菌的菌落 2.划线分离的操作方法：1.取9ml无菌平板一套在火焰旁按无菌操作法倒人15-20ml营养琼脂,让其冷凝成平板。2.左手拿上述平板,右手拿接种环在火焰上灭菌后沾取原始分离物在平板上平行划线三条3.将接种环在火焰上灭菌,左手平板转动大约70度,用灭菌接种环通过第一次划线的地方作二次划线,亦划三条。4.同上法再作第三次,第四次划线。 5.盖上平板盖，将平板倒过来置28-30℃下培养2-4天后观察结果.划的好应在第四次划线处出现单个菌落。 实验9 （微生物的分离—平板划线法） （一）平板分离法： 1、划线分离法：快速、方便分段划线 （适用于浓度较大的样品） 连续划线 （适用于浓度较小的样品） 四、注意事项： 培养基的温度要适宜，不要太烫或温度太低。 菌液10倍稀释时要混匀。平板要放置10分钟后在放入培养箱。 作业 P74 1.结果（１） 思考题（１） 录象观看： * 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离 1.平板分离法。 制平板：每组制培养皿3付。在无菌培养皿底部注明稀释度、姓名、学号。 30-300 colonies/plate will be counted 固体培养基表面细菌菌落（照片） Colony morphology 放线菌菌落形态： A类 B类 A：不产大量气生菌丝 B：产大量气生菌丝 青霉属 毛霉属 实验十一、微生物的分离与纯化（二） Inoculating an agar plate to obtain single colonies Mixed culture Pure culture 微生物纯培养的生长 纯化（平板划线法） 倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养） 培养 * * *