第二章 色谱法应用基础-薄层色谱.pptVIP

第二章 色谱法应用基础2.2 薄层色谱 2.2.1 薄层色谱的特点及原理 原理 吸附剂—载体（固定相） 流动相经吸附剂，借毛细管作用上升 根据待分离组分对流动相、固定相相对亲和力不同加以分离。 核心：吸附、解析、再吸附、再解析…… 常用：吸附薄层色谱 薄层色谱的特点 方法简便、价格低廉 分析快速（GC、HPLC时间长） 在色谱板上检测样品，不丢失组分 可使用多种显色剂，既能检测所有组分，也可只检测指定组分 可在同一色谱板上同时分离多个样品（定性、定量分析和跟踪反应过程，二次展开） 所需样品量少，5～10mg 灵敏度高 TLC与HPLC比较 TLC与HPLC比较 2.2.2 薄层色谱性质 样品（待测混合物）性质 固定相 流动相（展开剂） 重点选择展开剂 1）样品（待测混合物）性质 溶解性：极性、弱极性和非极性溶剂溶解性 酸碱性：pH值 极性：相似相溶 一般有机物的极性由小到大排列顺序 饱和烃＜不饱和烃＜醚＜酯 ＜醛、酮 ＜胺 ＜羟基化合物＜酸 ＜离子化合物（如R+NH3， RCOO-等） 2）常用吸附剂的吸附能力 蔗糖＜纤维素 ＜淀粉＜碳酸钙 ＜硫酸钙 ＜碳酸镁 ＜硅胶＜活性炭 ＜氧化镁 ＜三氧化二铝 亲脂性化合物TLC用固定相 三氧化二铝、硅胶、乙酰纤维素等 亲水性混合物TLC用固定相 纤维素、硅藻土、聚酰胺和离子交换树脂 常用TLC吸附剂 硅胶（Silica Gel） 多孔网状结构的中性或弱酸性吸附剂，适用于酸性及中性物质的分离（大部分有机物均可），碱性化合物能与硅胶作用，拖尾或无法展开 氧化铝 可用于碱性或中性化合物的分离 纤维素 亲水性强，用于亲水性化合物的分离 按照吸附剂（固定相）分类TLC可分为 吸附薄层色谱 是以吸附剂（固定相）和被分离物之间的吸附作用为基础进行样品分离的形式 分配薄层色谱 利用被分离物在流动相和固定相的相对极性差异来分离的形式 吸附薄层色谱和分配色谱的主要特点 2.2.3 展开剂及三者关系图 1）常用展开剂洗脱能力（溶剂从吸附剂上解脱被吸附物质的能力） 石油醚（己烷、戊烷等）＜环己烷＜二硫化碳＜四氯化碳＜四氯乙烯＜苯＜二氯甲烷＜三氯甲烷＜乙醚（无水）＜四氢呋喃＜乙酸乙酯（无水）＜甲基乙基甲酮＜正丁醇＜乙醇＜甲醇＜水＜冰乙酸＜吡啶＜有机酸 洗脱能力逐渐增强 2）三者关系图 2.2.4 TLC展开方式 上行展开 下行展开 一次展开 二次展开 单向展开 双向展开 径向展开 2.2.5 TLC显色方法 1）化学法 a 芳胺类 Ehrlich试剂 菲醌（主要用于邻苯二胺类） 茚三酮（用于鉴定脂肪胺、氨基酸等） 如L-丙氨酸、甲酯、（S）-2-氨基丙醇等鉴定 另一机理 b 酚类化合物 喷洒重氮盐，形成有色染料斑点 2%FeCl3显色，黄褐色 氨水（熏）显色 c 醛类化合物 d 其它方法（通用） 高锰酸钾氧化法 硫酸法 酸碱指示剂 pH指示剂，溴酚蓝，甲基橙等 2）物理法 a 紫外下观察化合物荧光 萘、蒽醌的磺化物 256nm b 荧光法 采用荧光吸附剂，或采用荧光物质溶液处理滤纸 F254 c 碘熏法 2.2.6 定性分析 1、Rf值 又称比移值，是溶质的运动速度与展开剂的运动速度之比值。 2、影响Rf值的因素 吸附剂的性质，吸附剂极性大，Rf ，反之Rf 展开剂的极性，极性大Rf ，反之 Rf 展开剂的酸碱性 对于酸性化合物 中性展开剂Rf＞碱性展开剂的Rf 对于碱性化合物 中性展开剂Rf＞酸性展开剂的Rf 溶质的性质 极性大Rf值降低，极性小Rf值增大。 分子量大， Rf值降低 其它影响因素 薄层厚度、展开距离、展缸内蒸汽的饱和度、点样量、薄层含水量等 3、Rf值与定量分析 根据标样的Rf值与试样的Rf值进行比较进行定性分析 显色特性，官能团的专属性显色剂（与标样一致） 原位扫描，吸收峰最大吸收波长与标样一致 与其他方式联用，将斑点洗脱收集，使用GC、HPLC和IR等联用分析与标样一致 2.2.7 定量分析 目测比较法（斑点大小，颜色深浅，误差大） 测定面积法（比目测法稍高） 洗脱测定法（将斑点处吸附剂取下，用溶剂洗脱后，使用比色法、分光光度计等测量） 薄层扫描仪 吸收测定法（钨灯，氘灯） 反射法测定：灵敏度低，重现性好 透射法测定：灵敏度高，易受干扰 荧光测定（氘灯，汞灯） 直接法（斑点能产生荧光） 荧光减退法（斑点能吸收紫外光，但不产生荧光） 扫描方式 线性扫描（光束比斑点略长，单向扫描） 锯齿扫描（微小正方形光束，不规则斑点） 2.2.8 发展趋势 高效化 微量化 灵敏检测手段 实用化、自动化 定量化 作业 1、a）下列化合物选择适宜的显色剂；b）下列化合物TLC分析时适宜的吸附剂。 十二烷基苯磺酸钠 十二