（谢瑶）实验性肌炎动物模型制作的研究1.pptVIP

实验性肌炎动物模型的研究Experimental autoimmune myositis in rats-clinicopathic and immunologic studies 谢 瑶 北京中日友好医院 风湿免疫科 特发性炎性肌病(IIM)的概述 以肌肉为靶器官的自身免疫性疾病: PM、DM、IBM 病因及发病机制尚不清楚 中心环节:免疫调节和免疫反应的异常 病理学特点:肌纤维变性坏死和再生伴淋巴细胞浸润 IIM 概 述 免疫组化特点： PM/IBM: “CD8/MHC-I 复合物”损伤 DM: 束周萎缩，B细胞及CD4+T细胞浸润 EAM研究近况 建立理想的动物模型，是研究IIM的发病机制和治疗最有效地工具之一 目前国内尚无系统研究，国外将自身免疫性肌病的动物模型分为：自发性、诱导型和转基因型三种 EAM研究近况 国外： 国内： 目前动物模型的优缺点 优点：成功率较高，方法成熟 国内EAM存在的不足： 症状较轻，炎症持续时间较短 无免疫组化分析 抗原性诱导物缺乏进一步分析 本课题的研究目的 建立实验性炎性肌病动物模型深入研究IIM的发病机理 观察比较激素、蛋白酶体抑制剂在肌炎动物模型的疗效 实验methods（EAM的建立） 制备异种肌匀浆，采用Bradford方法测定蛋白浓度 设置模型组和对照组，免疫SD大鼠，观察收集资料 检测血清肌酶，肌肉组织病理检查，图像分析 实验方法（ 模型组动物免疫方法） 实验方法（ 对照组动物免疫方法） 实验方法（动物肌炎检测方法） 肌酶谱的测定：实验前、免疫注射第1、2、3、4、5周后分别采血4-6ml/只，取上清检测肌酶 病理检查：分别于免疫注射后1、2、3、4、5周取大鼠的前肢近端肌肉、前肢后端肌肉、后肢近端屈肌、后肢近端伸肌、后肢远端骨骼肌组织各两条，10％甲醛固定，石蜡包埋，HE染色；新鲜组织同时液氮冻存 实验方法（肌肉组织免疫组化染色） 骨骼肌组织石蜡切片，常规免疫组化染色，检测炎性细胞表达CD4、CD8、CD20分子的情况 骨骼肌组织冰冻切片，常规免疫组化染色，检测肌细胞膜表达MHC-I分子的情况 实验方法（EAM的治疗） 将肌酶升高的大鼠分为 激素治疗组（强的松5mg/d，每日灌胃） 蛋白酶体抑制剂治疗组 （MG-132 1mg/ml，每周尾静脉注射1ml） 对照组（未作任何治疗） 治疗1个月后处死 比较三组间肌酶和肌肉组织免疫病理改变 结 论 应用兔骨骼肌匀浆、FCA、PT可以成功建立EAM 本研究动物模型与人类PM在肌酶、病理改变上具有相似之处，为人类肌炎的发病及治疗研究提供理论依据 MG-132对EAM有一定的治疗作用但疗效不及强的松，MG-132在人类肌炎中的应用有待进一步的研究。 * * Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology 异种肌匀浆 柯萨其病毒 易感动物 EAM C蛋白 不同程度提 纯的myosin 层粘连蛋白 Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology 肌匀浆＋FCA共1ml（1:1） 21 day 肌匀浆＋FCA共1ml（1:1） 28 day 肌匀浆＋FCA共1ml（1:1） 14 day PT1ml (2ug/rat) 肌匀浆＋FCA共1ml（1:1） 7 day PT1ml (2ug/rat) 肌匀浆＋FCA共1ml（1:1） 0 day 腹腔注射 皮下注射 免疫时间 生理盐水＋FCA共1ml（1:1） 21 day 生理盐水＋FCA共1ml（1:1） 28 day 生理盐水＋FCA共1ml（1:1） 14 day PT1ml (2ug/rat) 生理盐水＋FCA共1ml（1:1） 7 day PT1ml (2ug/rat) 生理盐水＋FCA共1ml（1:1） 0 day 腹腔注射 皮下注射 免疫时间 Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology Dept of Rheumatology 实 验 结 果 免疫1周病检未见明显病理改变 免疫2周 间质炎症反应明显 血管腔内及周围炎性细胞浸润 HE染色 20x HE染色 20X Dept of Rheumatology 实 验 结 果 Dept of Rheumatology 免疫