cyclind-,1-与p16在子宫内膜异位症中表达及临床意义.pdfVIP

中文摘要 细胞周期素Dl与p16在子宫内膜异位症中的表 达及临床意义 摘 要 目的：子宫内膜异位症指有生长功能的子宫内膜 组织出现在子宫腔被覆粘膜以外的身体其他部位。它常 导致性交痛、痛经、盆腔痛及不孕。主要发生在生育年 龄妇女，尽管是一种良性病变，但其临床及病理表现呈 细胞增生、浸润、转移及复发，类似于恶性疾病，严重 影响了妇女的身体健康和生活质量。虽然本病的提出至 今已有140余年的历史，但发病机制尚未完全阐明，临 床治疗手段也不十分理想，且治疗后的复发率高。目前 已成为妇科领域仅次于恶性肿瘤的又一难治性疾病，亟 待从临床和基础两方面对本病加强研究，以提高对子宫 内膜异位症的诊疗水平。就子宫内膜异位症的发病机 制，几十年来国内外众多学者作了大量的工作，尤其近 十几年来分子生物学技术的迅猛发展，使子宫内膜异位 症的基础研究深入到了一个新的领域，认为子宫内膜异 位症是一种多因素相关疾病，它是由多个基因位点和环 境之间相互作用的结果，多个基因位点的突变、缺失及 过度表达都与子宫内膜异位症的发病有关。子宫内膜异 位症与恶性肿瘤有相类似的生物学行为，尤其是在异位 内膜细胞的异常增生、转移、复发方面更为相似。 CyclinD，和p16是目前公认的两种与肿瘤发生密切相关 的最重要的细胞周期调节因子。本研究选择CyclinD， 中文摘要 和p16两种细胞周期调节蛋白，测定它们在子宫内膜异 位症中的表达、两者的相关性及与子宫内膜异位症临 床分期及愈后的关系，从而为子宫内膜异位症的发病机 制提供新的依据，为寻找新的、更有效的临床诊疗方法 提供理论基础。 方法：本研究采用病例对照研究方法对CyclinDl 和p16在子宫内膜异位症中的表达进行研究。81例标 本全部来源于河北医科大学第四医院妇产科2002年11 月～2003年12月住院行腹腔镜手术治疗的患者，其中 卵巢巧克力囊肿53例，I期2例，II期13例，III期15 例，Iv期23例，分期标准依据1985年美国生育协会 (American Fertility Society)的修正分期法(revised American AFS—r)，I期、II期为早期病 Fertility Society 例，III期、Iv期为晚期病例。子宫腺肌症28例；另 取因其它妇科疾病而手术切除子宫的正常在位子宫内膜 16例做为正常对照，全部病例均经组织病理学证实， 术前3个月未行过激素治疗。手术切除的卵巢巧克力囊 肿标本取囊壁，子宫腺肌症取肌壁间的内膜异位组织， 正常对照仅取内膜组织不含肌层，所有标本经10％甲 醛固定，石蜡包埋待切片。免疫组织化学方法(S．P法) 测定CyclinDl和p16在各种组织中的表达。免疫组化 步骤：石蜡切片脱蜡至水(组织切片41xm)， 3％H202室温孵育5—10分钟，以消除内源性过氧化物酶 活性。 蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟。枸橼酸盐溶液 热修复20分钟，(95℃以上)。PBS冲洗5分钟X3 次。正常山羊血清封闭，室温孵育lO分钟。倾去血 中文摘要 清，滴加适当比例的一抗或一抗工作液，即鼠抗人细胞 周期素D．单克隆抗体工作液，鼠抗人p16单克隆抗体 浓缩液(1：100)，37℃孵育60分钟或4℃过夜， PBS冲洗5分钟×3次。滴加生物素标记二抗工作液， 37℃或室温孵育10．20分钟，PBS冲洗5分钟×3 次。滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵 育10．20分钟。PBS冲洗5分钟×3次。自来水充分 冲洗，复染，封片，阅片。阳性结果判定标准：阳性染 色为棕褐色颗粒，CyclinDl、p16阳性产物均主要定位 于细胞核上。根据着色强度及范围分为阴性(一)：无 阳性染色细胞或细胞着色率5％；弱阳性(+)：阳 性细胞数5％～25％；阳性(十+)：阳性细胞数 25％～50％；强阳性(+++)：阳性细胞数50％。 结果：(1)CyclinDl在各种组织中的表达：16例正 常子宫内膜CyclinDl阳性0例，阴性16例，阳性表达 率0．00％；53例卵巢巧克