植物组织培养课件3.ppt

第3章 培养基 （1）MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。 特点：无机盐离子浓度较高，为较稳定的缓冲体系，营养丰富。广泛的应用于植物的器官、花药、细胞和原生质体的培养。 （2）White培养基：由White为培养番茄根尖而设计的。 特点：无机盐浓度较低，适于生根培养。 (4)B5培养基:是1968年由Galmborg等设计的。 特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素，适用于双子叶植物特别是木本植物。 3.1 培养基的成分 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 （C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca） 氮：由硝酸盐和铵盐提供 铵盐过高会引发玻璃化苗 氨基酸(AA)：是很好的有机氮源，可直接被细胞 吸收利用。最常用的是甘氨酸，其 他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、 天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 天然复合物：椰乳、麦芽浸出物、酵母浸出 物、番茄汁等，成分较复杂，大多 含有氨基酸、维生素、酶等复杂化 合物，因为所含成分质量和数量不稳 定，尽量避免使用。 作用：顶端分泌，诱导细胞分裂，促进生根。 用量：mg/L 吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸 ：NAA（naphthalene acetic acid） 吲哚丁酸：IBA（indolebutyri acid） 2,4-二氯苯氧乙酸：2,4-D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) 用法：溶于95%酒精或者NaOH 生长素作用强弱顺序： 种类： 6-BA(6-苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) TDZ（Thidiazuron ） 用法：溶于0.5 MHCl和NaOH GA3： 作用：促进幼胚发育，促进细胞伸长，打破休眠。 用法：易溶于水，一般用95%的酒精配成母液贮存。 琼脂是一种由海藻中提取的多糖类物质，本身并不提供任何营养，40 ℃凝固。固体培养时最好的固化剂。 用量：0.7%-1%。 凝固：琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。 活性炭： 作用：利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响，防止褐变；利于生根。 浓度：5—30g／L。 3.2 培养基的配制 1、 母液(stock solution)的配制和保存 所谓母液是欲配制液的浓缩液。 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml 。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 ＭＳ培养基母液的配制 MS母液配制： MSI 大量元素 20X MSII 微量元素 200X MSIII 铁 盐 200X MSIV 有机 物 200X MSV 肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml 母液配制时应注意事项： ①母液配好后放人冰箱内低温保存（4℃），用时再按比例稀释。 ②其中III、IV、以及激素类物质应以棕色瓶盛装。 ③母液使用前摇动瓶子，如有沉淀、絮状物、微生物污染应停止使用 ④取样时移液管要对应取样，防止交叉污染 2、培养基的配制： MS＋BA2＋NAA0.2＋糖3.0％＋琼脂0.7％ PH=5.8 MS： MS I 50 ml MS II 5 ml MS III 5 ml MS IV 5 ml MS V 5 ml BA： 20ml; NAA：2ml 糖： 30g; 琼脂：7g MS+BA2.0+NAA0.2+3%蔗糖+0.7%琼脂