肝脏型脂肪酸结合蛋白介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡-病理学与病理生理学专业论文.docx

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优秀毕业论文 精品参考文献资料 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学 位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科 大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内 容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,实验材料、原始数据、申 删 椒权 溅归 洲 垤医 学 辄 揪 责 缸 一肾‰所小吓J 裤肿乖3ITd. 躁一移藩≯。萋.;即 日 口,nH 、_.,卜 吗移 导鲫噬-广一—意 章& 缎。瞳又 红 协《位. 河北医科大学 研究生学位论文独创声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中 特AIjJD以标注等内容外,文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果, 指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。 研究生签字娠’岛导师签章:嗄粤时 矽旷年弓月弓7日 万方数据 目 录 中文摘要 .1 英文摘要 ·4 英文缩写 ·9 研究论文肝脏型脂肪酸结合蛋白介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引 起人近端小管上皮细胞凋亡 前言日!J舌 ·10一‘l 材料与方法 12 结果 ··21 附图 24 讨{仑 ··34 结论 “36 参考文献 ·37 综述 44 致谢 56 个人简历 57 万方数据 中文摘要 肝脏型脂肪酸结合蛋白介导 脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡 摘 要 目的:蛋白尿是慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CI①)的共同表 现,大量蛋白尿可引起肾小管及间质的损伤和炎症。而与白蛋白(albumin。 Alb)结合的游离脂肪酸(free fat acids,FFAs)通过脂毒性,引起细胞功能障 碍和损伤,参与了肾间质损伤的过程。已有研究表明饱和脂肪酸棕榈酸 (Palmitic acids,PA)可诱导非脂肪细胞的损伤和凋亡。 脂毒性包含了多种应激反应,如内质网应激和氧化应激等。内质网应 ??通过未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)维持细胞内环境的 稳态。但持久强烈的ERS会通过内质网相关性死亡途径(ER.associated death),引起细胞凋亡。 肝脏型脂肪酸结合蛋白(1iver-type fatty acid binding protein, L.FABP/FABPl)是脂肪酸结合蛋白家族一员,人肾近曲小管上皮细胞表 达。尿L.FABP被认为与肾小管间质损伤密切相关,是监测CKD进展的 标志物之一。 本课题前期研究表明,油酸(Oleic acids,OA)诱导L.FABP表达和 ERS,并导致HK.2细胞凋亡。为了进一步探讨L.FABP与ERS之间的关 系,本研究比较沉默IlK.2细胞L.FABP前后,高PA和OA干预下的HK.2 细胞,ERS相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达变化,试图明确L.FABP在 FFA通过ERS诱导细胞凋亡中的作用,为临床FFAs引起肾小管细胞凋 亡提供实验依据。 方法:1实验分组: (1)HK-2细胞随机分为Control,高棕榈酸(PA),高油酸(0A)和高蛋 白(Alb)干预组。 (2)HK.2细胞分别转染shNC或shL.FABP后,分别给予高PA、OA 和Alb干预,并设立对照组shNC、和shL.FABP。具体实验分组如下。 万方数据 r匦 中文摘要 圆t—OA+shLLI — FABP I 圃{一 +圈+匦亟鲴 圈{一L I灏稽晴瀚:j 2 MTT法确定HK一2细胞50%生存率的PA浓度; blot法确定PA、OA干预HK.2细胞时间; 3 Western 4观察PA、OA和Alb干预对L—FABP、HK.2细胞内质网应激相关 蛋白及凋亡蛋白表达的影响; 5观察转染shL.FABP质粒后,PA、OA和Alb干预对HK。2细胞中 的L.FABP、内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白表达的影响。 结果:1 确定PA对HK.2细胞的干预浓度 不同浓度PA干预HK一2细胞24h,发现PA浓度为200 u mol/L HK.2 细胞生存率为40%,接近50%。故选取PA浓度200 la mol/L为干预浓度。 2 PA干预HK.2细胞L.FABP的表达变化 PA分别干预HK.2细胞3h,6h,12h,24h和48h的结果显示:与干 预前比较,3h,6h和12h L.FABP蛋白表达无明显变化,24h表达达到峰 值,48h表达减少。 3 OA干预HK.2细胞L.FABP的表达变化 OA分别干预IlK.2细胞3h,6h,12h,24h和48h的结果显示:与 干预前比较,12h,24h和48h L.FABP蛋白表达增加,但24h达到峰值。 4 PA、O

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