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《食用菌加工工艺学》 课程实验指导书 佛山科学技术学院 2006年5月31日 目 录 实验一 食用菌菌种分离技术-------------------------------1 实验二 食用菌的深层发酵技术-----------------------------6 实验三 食用菌原种和栽培种生产-------------------------- 8 实验一 食用菌菌种分离技术 目的和要求 掌握食用菌组织分离的方法和实际操作技术，明确食用菌菌种分离在食用菌生产中的重要性。 实验内容 每班同学分为6个小组，(每4个人一个小组)组织分离接种以小组为单位进行，每个同学接种2支试管母种。 每小组每人采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离和菌盖带菌褶部分进行组织分离。(各做一支试管) 仪器、设备和材料 试管斜面PDA培养基、平菇和香菇较成熟的子实体、酒精灯、接种针、75%酒精，火柴以及恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、天平、无菌操作台、解剖刀等。 实验原理 食用菌菌种分离方法有种，组织分离法、孢子分离法、耳木分离法和土中菌丝分离法组织分离法。 平菇选朵大肉厚子实体作种菇。香菇选择菇形圆整、肉厚较成熟未开伞的作种菇。 2、种菇消毒 将选好的种菇剪去过长的菌柄，放入接种箱内进行消毒。种菇均用75%的酒精擦洗菌盖、菌柄。 3、组织分离接种 用无菌解剖刀从菌柄中部纵向切开，或把种菇撕开，在菌盖与菌柄交界处或菌盖带菌褶部分挑取一小块组织，移接到试管PDA培养基上。 4、菌种培养及保存 置28℃左右温度下培养3～5天，组织块上产生白色绒毛状菌丝，并向培养基上生长。菌丝长满斜面后，管口用塑料薄膜或防潮纸包扎，即可放入5℃冰箱中保藏。 六、作 业 根据观察结果同一菌种不同部位组织分离后菌丝生长情况，评价何种部位更适宜该菌种的组织分离繁殖，并对操作的各个环节提出改进建议。 实验二 食用菌的深层发酵技术 一、目的和要求 学习掌握食用菌的深层发酵技术。 二、实验内容 食用菌的深层发酵。 三、仪器、设备和材料 1、实验材料 平菇母种、麸皮。 2、试剂 葡萄糖、蛋白胨，磷酸二氢钾，硫酸镁。 3、仪器 高压蒸汽灭菌锅、天平、摇床。 四、实验原理 人为控制食用菌生长发育所需的条件，液体摇床条件下培养平菇菌丝。 五、实验步骤 （一）摇瓶培养 （1）培养基（每L），0.1mpa灭菌20min。 (麸皮50g（煮沸后取其滤液），葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，pH值自然。 (马铃薯200g（去皮，切成薄片，加水1000ml煮沸取汁），葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，pH值自然。 （2） 接种：培养基冷却后接种平菇菌种块。 （3）培养 培养温度24～26℃，培养5～7d后培养液中充满浅白色菌球，发酵液放置短时间后呈透明状，pH值为4.5，这表明菌种已长好，可作为二级摇瓶培养种子用，二级摇瓶培养接种量10％。 （二） 种子罐培养 （1） 培养基 葡萄糖2％，豆饼粉1％（小于20目），酵母膏0.1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，培养液装量70％，蒸汽压力0.1mpa，20min灭菌。 （2） 培养 一级种子罐60～100L，接种量3％～5％，于24～26℃，通气搅拌下培养，通气量1：1（每分钟体积比），罐压0.5*105 pa，培养7d左右，当培养液中充满菌球，培养液变成透明即可作为二级子罐的菌种。二级种子罐体积400～500L，培养基与一级种子罐相同，接种量10％，发酵5d左右，发酵终点与一级种子罐相同。 （三）发酵罐培养 发酵罐体积一般有5000L、1.5*104L、3*104L等规格。 培养基 蔗糖3％，黄豆粉或黄豆饼粉1.5％，玉米粉1.5％，蛋白胨0.1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，pH值5.0～6.5，蒸汽压力0.12mpa，灭菌1.5h。 发酵 接种量10％，发酵周期5d左右，至发酵液呈黄棕色充满菌球，菌球开始自溶，菌球干重达1％～1.2％，静止后发酵液透明，pH值约为4.5以下，残糖量约为0.2％左右时即可终止发酵。 实验三、食用菌原种和栽培种生产 一、实验目的和要求： 1．掌握原种和栽培种培养基制备技术 2．学会原种和栽培接种方法 3．掌握菌种培养的环境条件控制方法 4．学会菌种质量鉴定方法 二、实验内容： 1．原种、栽培种培养基制备 2. 原种、栽培种接种、培养。 三、主要仪器设备及配套数： 1.仪器或其它用具：超净工作台，高压灭菌锅，接种针，镊子，菌种瓶。 2.溶液或试剂：75%乙醇。 3.菌种：平菇母种、原种。 4.培养基：棉籽壳培养基。 四、实验原理： 人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。 1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体。