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液相色谱—质谱联用技术及其在医药领域的综合应用的介绍 摘要：液相色谱-质谱联用技术是20世纪90年代发展起来的一门综合性分析技术,高分离能力,高灵敏度,和专属性强的优势,在药物成分的鉴定分析、药物代谢研究、中药和保健品中非法添加化学药物成分的鉴定分析以及药物残留分析等方面且随着现代化高新技术的不断发展及液相色谱-质谱联用技术自身的优点,液相色谱-质谱联用技术必将在未来几年不断发展且发挥越来越重要的作用. 液相色谱-质谱联用技术(Chromatography—MassSpectrometry)是20世纪90年代发展起来的一门综合分析技术，LC的高分离效能与MS的高灵敏度，高选择性使之成为当代最重要的分离和鉴定分析方法之一，同时也成为医药领域研究中强有力的工具。 1 IC／MS技术的发展 1977年液相色谱一质谱联用仪开始投放市场；1978年LC／MS首次用于生物样品中药物分析；1989年LC／Ms／MS研制生产取得成功；1991年大气压离子化接口(AtmospherePressure Interfaca，API)的LC／MS用于药物开发；1997年LC／MS用于药动学筛选；1999年API接口的Q／TOF LC／MS／MS投放市场。药物色谱分析中不同方法所占比例为1990年：HPLC占85％，GC／MS占12％，I。C／MS占3％；2000年：HPLC约占15％，GC／MS占5％，LC／Ms占8【)％[1J]。 LC／MS自70年代Homing等进行开创性研究工作以来，经过30年的发展已日趋成熟，各种商品化仪器相继面世，应用日益广泛。离子阱技术由w．Pawl在1955年创立，并于1989年获得诺贝尔物理奖，J．B Fenn于1989年创立了电喷雾离子化技术(electrospray ionization，ESI)，并因此获得2002年诺贝尔化学奖，这是质谱技术发展的重要标志。 2 液相色谱一质谱联用仪主要是由液相色谱系统、连接接口、质量分析器和数据处理系统组成。API是一种在大气压下将溶液中的分子或离子转变成气态离子的接口，它包括电喷雾离子化(electrospray ionization，ESI)和大气压化学离子化(Atmosphere Pressure Chemical Ionization，APCI)两种电离方式，是LC／MS常用的离子源。这两种离子化方式的区别在于其在大气压下产生气相离子的方式不同，但两者都是非常温和的离子化技术，很少产生甚至不产生碎片。APCI比较适合于中性或极性小的化合物的分析，而ESI则更适合于极性大、对热不稳定的碱性或酸性化合物的分析。 3 液——质联用技术的特点分析 HPLC—MS除了可以分析气相色谱——质谱(GC—MS)所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物之外，还具有以下几个方面的优点。 3．1 分析范围广MS几乎可以检测所有的化合物，比较容易地解决了分析热不稳定化合物的难题。 3．2 分离能力强即使被分析混合物在色谱上没有完全分离开，但通过MS的特征离子质量色谱图也能分别给对；它们各自的色谱图来进行定性定鼍。 3．3 定性分析结果可靠可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息。 3．4 检测限低MS具备高灵敏度，通过选择离子检测(SIM)方式，其检测能力还可以提高一个数量级以上。 3．5 分析时间快HPLC—MS使用的液相色潜柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果。 3．6 自动化程度高HPLC—MS具有高度的自动化。 4 液——质联用技术的应用 4. 1 药物成分的鉴定分析 的特点。所以近些年来HPLC—MS已经成为药物分析方面的有利工具。近几年用HPLC—MS对各种药物尤其是违禁药物及其代谢产物的研究，国内外有大量的文献报道，如尿中的河豚毒素、 抗生素、舒喘宁和m液中的安非他明、奥美拉唑、罗哌卡因、氨磺必利、前列腺索E2以及艾滋病病毒等痕量残留的分析。可以预测。随着对HPLC—MS研究的深入和该技术应用的普及，HPLC—MS技术将在药物和保健食品中违禁成分分析中发挥更大的作用。 4. 2 药物代谢研究中的应用 LC／MS在药物代谢研究中除了可确定分子量以外，还可以根据特异性断裂规律推导出重要部分结构甚至是完整的结构。其依据是由于多数药物的代谢物保留了原形药物分子的骨架结构，因此，代谢物可能与母体药物具有相似的裂解规律，即丢失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征离子，利用LC／MS可以迅速找到可能的代谢物，并鉴定出结构。Lee（见文献）等总结具体方法步骤有以下几点： 1）测定原形药物的质谱；2）选择准分子离子、加合离子和主要的碎片离子进行多级质谱分析；3）选择原形药物的主要中性丢失，测定生物样品的中性丢失谱，图谱中