人工种子制作.PPTVIP

渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。 通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯等）生成。可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。 分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育期的胚状体。 （2）人工种皮制作 ? 理想的人工种皮(Artifical seed coat)应该具有保护 胚状体的功能，并且具有无毒、良好的通气性、抗 污染、适合运输等特点。 ? 最早采用的材料是聚氧乙烯，但是具有一定毒性、 易溶解于水等不足。目前采用海藻酸盐较多，其具 有成胶容易、操作条件温和、使用方便、毒性低、 成本低廉等优点。但是也存在一些缺点，例如：水 性营养成分易流失、表面易结团等。因此，开发理 想的人工种皮材料仍是一个重要课题。 （3）人工胚乳配制 ? 人工胚乳(Artifical endosperm)主要包括无机盐 、碳水化合物、蛋白质等（培养基组分）。是胚 胎发育的营养保证。 ? 由于糖等物质的存在易导致微生物污染，所以还 要加入防腐剂、抗菌素、农药等成分。 藻酸钠等水溶性凝胶与Ca2+进行离子交换后凝固 （4） 包埋 ? 包埋是人工种子制作的重要一环。方法主要有以 下两种： ? 干燥法：这是比较早的一种包埋方法。将胚状体 置于23℃、70%左右相对湿度、黑暗条件下逐渐 干燥，然后用聚氧乙烯等种皮材料包裹。 ? 水凝胶法：这是目前比较常用的一种方法。用海 的特点包埋单个胚状体或芽。种子硬度由凝胶浓 度与络合时间控制。 海藻酸钠包埋示意图 包埋液（人工胚乳）制备： 2%-3%的海藻酸钠+营养 物、生长因子等。 将成熟的体细胞胚胎与包 被液相混合，然后将其滴 入（只允许一个通过）适 当浓度的氯化钙溶液中， 经过络合作用（生成海藻 酸钙）的造形过程，在20- 30分钟内形成内含细胞胚、 有一定硬度的雏形人工种 子。 贮藏与发芽 一般将人工种子贮藏在4—7℃低温、相对湿度小 于67%的条件下。实际上随贮藏时间的延长,人工 种子的萌发率会显著下降。 三、人工种子储存 1、人工种子的优点 ? （1）便于运输和储藏（相对于试管苗）。 ? （2）人工胚乳可根据不同植物的要求配制，通 过加入植物激素、有益微生物或抗病、抗虫成分 ，使人工种子优越于天然种子。 ? ? ? ? （3）可以固定杂种优势，加速良种繁育。 （4）可作为植物基因工程和遗传工程的载体。 （5）可保存珍贵稀有植物品种。 （6）大规模繁殖植物（尤其是没有种子和种子 昂贵的植物） 四、人工种子优点及存在问题 2.存在的问题 ? （1）人工种皮性能不尽人意。 ? （2）还没有一种符合多数植物胚状体需要的人 工胚乳。 ? ? ? ? （3）胚状体储藏阶段的休眠控制； （4）如何保证长期储藏而又不影响萌发率； （5）制作流程较繁琐、成本高。 （6）许多植物还不能成功地诱导出高质量体细 胞胚。 举例： 一品红人工种子制作 为什么要制备人工种子：一品红又名圣诞花，属 大戟科。是在元旦和圣诞节前夕观赏 的一种著名盆栽花卉。 一品红常采用扦插繁 殖，繁殖速度慢。 如何制备人工种子： 器官发生途径：目前多以叶片、茎段为外植体诱 导愈伤组织，再分步诱导芽和根，生成苗。 体细胞胚途径：以苞片为外植体，离体诱导体细 胞胚，制作人工种子。 下面介绍这种方法。注意不同生长素/分裂素比例 对于体细胞胚诱导的影响。 （1）愈伤组织诱导： 将一品红苞片常规消毒，切成0.6cm2小块，接种 到添加不同浓度6-BA和2，4-D的MS培养基中 （表1），每瓶接种5片称重，第20天继代培养时 再称重。培养温度25度左右，暗培养。 2，4-D/6-BA比例较高时(2.0/0.5)有利于愈伤组织诱导 2，4-D：2，4-二氯苯氧乙酸（生长素） 6-BA： 6-苄基腺嘌呤（分裂素） （2）体细胞胚诱导 降低生长素2，4-D浓度(1.0/0.5)：体细胞胚分化率升高 活性炭吸附减轻酚氧化的褐变，也有促进萌发效果 （3）包埋与萌发 ——海藻酸盐法 胚状体悬浮在3%的海藻酸钠+1/2MS培养基+6- BA0.5mg/L（分裂素）+GA3(赤霉素)0.5mg/L+ IBA0.5mg/L（生长素）+1.5%麦芽糖的混合液中(赤霉素 是生长调节剂，能促进不定胚发育成小植株) 滴入到2%氯化钙溶液里，络合15分钟，捞起，无菌水洗 涤，干燥成一定强度的人工种子胶丸。 播种在无激素的MS培养基上，25度，光照2000lx，12小 时/天，30天后计算萌发率。 1球形胚 2心形胚 3犁形胚 6人工种 4子叶期胚 5人工种子 子