问题分析指引-福际生物.PDFVIP

FOREGENE Plant Total RNA Isolation Kit Trouble Shooting 问题分析指南 以下针对植物总RNA 提取中可能遇到的问题进行分析，希望能对您的实验有所帮助。 另外，对于在操作说明和问题分析以外的其他实验或技术上的问题，我们设有专门的 技术支持帮助您。如有任何需要可联系我们：028或E-mali： Tech@ 。 离心柱发生堵塞 离心柱发生堵塞之后会造成 RNA 得率降低甚至不能纯化得到 RNA，同时提起得到的 RNA 质量低下。 常见原因分析： 1. 样本破碎不彻底。 样本破碎不彻底会使DNA-Cleaning Column 发生堵塞，同时会影响RNA 得率及质 量。我们建议在进行样本破碎的时候，在足量的液氮中快速研磨操作，尽量破碎样 本细胞壁、细胞膜等组织。对于多酚多糖的植物样本，我们建议您使用Plant Total RNA Isolation Kit Plus。 2. 吸取DNA-Cleaning Column 分离后的上清液时，吸入了可能的细胞碎片沉淀物。 吸取的细胞碎片沉淀物会使在进行RNA 吸附操作时（见操作步骤第5 步），将会堵 塞RNA-only Column 。我们建议在吸取该上清时一定要小心谨慎，以避免细胞碎片 被吸取。 3. 样本初始量过多。 样本使用量过多将会造成样本破碎不完全或者Buffer PRL1 或Buffer PSL1 裂解细 胞时不完全，导致纯化操作是纯化柱堵塞。Plant Total RNA Isolation Kit 每单次纯 化操作样本的初始最大量为 50mg 。对于多酚多糖的植物样本，我们建议您试用 Plant Total RNA Isolation Kit Plus。 4. 离心机的温度过低。 整个RNA 分离纯化除了液氮破碎样本组织外，所有的步骤均在常温（20-25℃）进 行。有些低温离心机的温度低于20℃，可能会造成DNA-Cleaning Column 和（或） RNA-only Column 的堵塞。如果发生这种现象，请将离心机温度设置到20-25℃， 并将裂解混合物和（或）添加了乙醇分离上清预热到37℃。 ©Copyright Foregene 2013/12. All rights reserved. 1/5 FOREGENE Plant Total RNA Isolation Kit Trouble Shooting 提取不到 RNA 或者 RNA 产量低 通常会有多种因素影响回收效率，比如：样本RNA 含量、操作方法、洗脱体积等。 常见原因分析： 1. 样本保存不当或样本保存时间过久导致RNA 已经降解。 建议：新采集的样本应立即放入液氮中速冻，之后长期保存于-70℃并避免样本的反 复冻融；或者将样本立即浸泡在RNA 稳定剂RNAlater 溶液中 （动物样本）。 2. 样本破碎裂解不充分导致纯化柱堵塞。 建议：在组织研磨时，请保证组织充分研磨，并在研磨完成后迅速转移至预先准备 好的Buffer PRL1 或Buffer PSL1 （确认已添加正确比例的β-ME，见操作步骤第1 步）中。 3. 洗脱液添加不正确。 建议：确认RNase-Free ddH O 滴加到了纯化柱膜中间位置。 2 4. Buffer PRL2、Buffer PSL2 或Buffer PRW2 中没有添加正确体积的无水乙醇。 建议：请按照说明书，在试剂盒使用前，Buffer PRL2、Buffer PSL2 和Buffer PRW2 中添加正确体积的无水乙醇并混匀。 5. 组织样本用量不合适。 建议：每500μl Buffer PRL1 或Buffer PSL1 使用组织量为50mg，组织使用过多会 导致 RNA 提取量降低并且得到的 RNA 纯度也会降低。我们强烈建议每单次 RNA 提取操作，样本初始用量一定不要超过50mg。 6. 洗脱体积不合适或洗脱不彻底。 建议：纯化柱的洗脱液体积为50-200μl ；若洗脱效果并不理想，建议在加入预热的 RNase-Free ddH O 后，延长室温放置的时间，例如放置5-10min。