分子机制研究试验设计.PPT

分子机制研究 实 验 设 计 龙 喜 带 教授 （上海市曙光学者、广西十百千第二层次人选） 主要内容 分子机制 设计基础 A-B-C 设计模式 A-B-C 设计案例 分子机制 生物大分子：核酸 ?? 蛋白质 疾病/现象 分子 A 分子 B 分子 C 设计基础（1） 细胞与生物功能 核、质、膜 细胞骨架 细胞周期 细胞凋亡 细胞通讯 设计基础（2） 生物大分子 DNA：基因与非基因 mRNA: 5’-UTR、3’-UTR、CDS Protein: 空间结构、修饰、转运、代谢 设计基础（3） 大分子物质关系 RNA Protein DNA 设计基础（4） 遗传信息的传递 转录 RNA剪接 翻译 翻译后修饰 设计基础（5） 生物信号通路 设计基础（6） 生物信号通路 Web: /index.html 设计基础（7） 研究对象 体外实验：细胞模型 体内试验：动物模型、临床实验 非体内外实验：离体样本 设计基础（8） 研究技术 定性分析技术：IHC、IF、IP、ChIP 定量分析技术：IHC、WB、RT-qPCR 定位分析技术：IHC、ISH 设计基础（9） 大分子检测技术 蛋白质：IHC、IF、WB、ELISA 核酸：PCR、印迹 核酸-蛋白质：CHIP、Luc、EMSA 蛋白质-蛋白质：IP 核酸-核酸：EMSA 设计基础（10） 细胞功能检测技术 细胞周期：流式 细胞凋亡：IHC、酶标、流式 细胞迁移：transwell 细胞增殖：CCK-8、细胞计数 A-B-C设计方案 A：研究的靶分子 C：（1）疾病如炎症、肿瘤等 （2）生命现象 B：机制 （1）单个分子或几个分子 （2）通路 研究内容 C A B 总体思路 研究内容 研究与分析A在C中的作用 研究与分析上述作用的机制（即B） 研究与分析B在A-C中的必要性 研究与分析A-B-C的科学价值 具体设计 研究方案（1） 研究与分析：过表达A对C的影响 研究与分析：敲低A对C的影响 研究与分析：补救A对C的影响 影响：如增殖、凋亡、迁移功能、结构等 研究与分析A在C中的作用 研究方案（2） 研究与分析：可能机制（B） 研究与分析：过表达A对B的影响 研究与分析：敲低A对B的影响 研究与分析：补救A对B的影响 研究与分析上述作用的机制 研究方案（3） 研究与分析：并过表达B后对C的影响 研究与分析：敲低B对C的影响 研究与分析：补救B对C的影响 以上过程应结合：Ahigh和Alow 研究与分析B在A-C中的必要性 研究方案（4） 研究与分析：A-B-C临床诊断价值 研究与分析： A-B-C临床治疗价值 研究与分析： A-B-C临床预后预测价值 研究与分析A-B-C的科学价值 A-B-C设计案例 TWIST2的抑癌作用研究 设计分析 A：TWIST 2 C：对肿瘤的抑癌作用 B：机制？ 研究内容设计 研究与分析TWIST 2在肿瘤中的抑癌作用 研究与分析上述作用的机制（即B） 研究与分析B在TWIST 2 –抑癌作用中的必要性 研究与分析TWIST 2-B-抑癌作用的科学价值 具体设计 原案例内容 研究TWIST 2对更多白血病细胞生长的影响 研究TWIST 2对OCL-AML2细胞及小数Baf3/BCR-ABL细胞只白血病能力的影响 研究TWIST 2对AML和CML患者原代细胞体外生长的影响 鉴定TWIST 2抑制白血病细胞生长所需的结构域 原案例内容 鉴定与TWIST 2表达相关的基因表达谱 鉴定受TWIST 2调控的可能基因 验证上述所鉴定的差异基因 该案例研究内容分析 研究内容设计与标题吻合 研究内容合理 科学价值明确 研究思路清晰 THE END