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分子机制研究试验设计
分子机制研究 实 验 设 计 龙 喜 带 教授 (上海市曙光学者、广西十百千第二层次人选) 主要内容 分子机制 设计基础 A-B-C 设计模式 A-B-C 设计案例 分子机制 生物大分子:核酸 ?? 蛋白质 疾病/现象 分子 A 分子 B 分子 C 设计基础(1) 细胞与生物功能 核、质、膜 细胞骨架 细胞周期 细胞凋亡 细胞通讯 设计基础(2) 生物大分子 DNA:基因与非基因 mRNA: 5’-UTR、3’-UTR、CDS Protein: 空间结构、修饰、转运、代谢 设计基础(3) 大分子物质关系 RNA Protein DNA 设计基础(4) 遗传信息的传递 转录 RNA剪接 翻译 翻译后修饰 设计基础(5) 生物信号通路 设计基础(6) 生物信号通路 Web: /index.html 设计基础(7) 研究对象 体外实验:细胞模型 体内试验:动物模型、临床实验 非体内外实验:离体样本 设计基础(8) 研究技术 定性分析技术:IHC、IF、IP、ChIP 定量分析技术:IHC、WB、RT-qPCR 定位分析技术:IHC、ISH 设计基础(9) 大分子检测技术 蛋白质:IHC、IF、WB、ELISA 核酸:PCR、印迹 核酸-蛋白质:CHIP、Luc、EMSA 蛋白质-蛋白质:IP 核酸-核酸:EMSA 设计基础(10) 细胞功能检测技术 细胞周期:流式 细胞凋亡:IHC、酶标、流式 细胞迁移:transwell 细胞增殖:CCK-8、细胞计数 A-B-C设计方案 A:研究的靶分子 C:(1)疾病如炎症、肿瘤等 (2)生命现象 B:机制 (1)单个分子或几个分子 (2)通路 研究内容 C A B 总体思路 研究内容 研究与分析A在C中的作用 研究与分析上述作用的机制(即B) 研究与分析B在A-C中的必要性 研究与分析A-B-C的科学价值 具体设计 研究方案(1) 研究与分析:过表达A对C的影响 研究与分析:敲低A对C的影响 研究与分析:补救A对C的影响 影响:如增殖、凋亡、迁移功能、结构等 研究与分析A在C中的作用 研究方案(2) 研究与分析:可能机制(B) 研究与分析:过表达A对B的影响 研究与分析:敲低A对B的影响 研究与分析:补救A对B的影响 研究与分析上述作用的机制 研究方案(3) 研究与分析:并过表达B后对C的影响 研究与分析:敲低B对C的影响 研究与分析:补救B对C的影响 以上过程应结合:Ahigh和Alow 研究与分析B在A-C中的必要性 研究方案(4) 研究与分析:A-B-C临床诊断价值 研究与分析: A-B-C临床治疗价值 研究与分析: A-B-C临床预后预测价值 研究与分析A-B-C的科学价值 A-B-C设计案例 TWIST2的抑癌作用研究 设计分析 A:TWIST 2 C:对肿瘤的抑癌作用 B:机制? 研究内容设计 研究与分析TWIST 2在肿瘤中的抑癌作用 研究与分析上述作用的机制(即B) 研究与分析B在TWIST 2 –抑癌作用中的必要性 研究与分析TWIST 2-B-抑癌作用的科学价值 具体设计 原案例内容 研究TWIST 2对更多白血病细胞生长的影响 研究TWIST 2对OCL-AML2细胞及小数Baf3/BCR-ABL细胞只白血病能力的影响 研究TWIST 2对AML和CML患者原代细胞体外生长的影响 鉴定TWIST 2抑制白血病细胞生长所需的结构域 原案例内容 鉴定与TWIST 2表达相关的基因表达谱 鉴定受TWIST 2调控的可能基因 验证上述所鉴定的差异基因 该案例研究内容分析 研究内容设计与标题吻合 研究内容合理 科学价值明确 研究思路清晰 THE END
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