1糖的定量测定.ppt

第一节 糖的定量测定 1.1 中性糖的测定 1.1.1苯酚-硫酸法 敏感度：1-60ug 葡萄糖的200ul溶液 方法：（1）制备5%的苯酚 （2）样品加入200ul苯酚（样品含有糖不超过100ug） （3）加入1ml浓硫酸 （4）静止10min后震荡混匀 （5）30min后，490nm下测定 1.1.2 Somogyi-Nelson法测还原糖 2Cu2++还原糖 Cu2O Cu2O+H2SO4 cu+ cu+ +MoO2-4 2Cu2+ + 蓝色溶液 敏感度：10-100ug 葡萄糖的1ml溶液 方法：（1）铜试剂A：25g无水碳酸钠，25g四水和酒石酸钾钠，20g碳酸氢钠和200g无水硫酸钠溶解在800ml蒸馏水中，溶解稀释1000ml，20℃以下保存 （2）铜试剂B:配制15%硫酸铜，每100ml溶液中加入1-2滴浓硫酸 （3）砷钼酸盐显色剂：溶解25g钼酸钠在450ml蒸馏水中，搅拌下加入21ml浓硫酸，加25ml砷酸钠溶液，混合后，37 ℃保温24h或55 ℃保温25min。 （4）1ml样品，加入1ml铜试剂（25mlA+1mlB），混匀，沸水加热20min，冷却至室温，加入1ml砷钼酸盐显色剂，蒸馏水稀释至25ml，560nm测定 1.1.3 蒽酮-硫酸法 敏感度：1-60ug 葡萄糖的200ul溶液 方法：（1）2g/L蒽酮试剂:溶解2g蒽酮于浓硫酸 （2）620nm测定 1.1.4 铁-苔黑酚法测定戊糖 敏感度：0.2-20ug 木糖的200ul溶液 方法：（1）10%W/V三氯乙酸溶液 （2）1.15%硫酸铁胺和0.2%苔黑酚的9.6M HCl溶液 （3）200ul样品中加入200ul样品（1），加热100 ℃，15min，冷却室温 （4）加入（2），混合，加热100 ℃，20min （5）冷却室温，660nm测定 1.1.5 苯酚-硼酸-硫酸法（测定酮糖） 敏感度：0.1-9ug 果糖的100ul溶液 方法：（1）2.5g的苯酚溶于50ml水，滴加入1ml丙酮，加入2g硼酸 （2）100ml样品，加入0.5ml试剂（1），加入1.4ml浓硫酸 （3）室温静止5min （4）37 ℃温浴1h （5）568nm下测定 1.1.6 己糖和6-脱氧己糖测定 方法：（1）硫酸试剂：6份硫酸加入1份水中（V/V），冷却 （2）半胱氨酸-苯酚溶液：含1%盐酸半胱氨酸和0.075%苯酚的水溶液 （3）0.25ml样品（2-8ug己糖和6-脱氧己糖）溶液，加入1.25ml硫酸，摇匀，浸入沸水3min，冰浴，加入0.25ml半胱氨酸-苯酚溶液，摇匀冰浴1h （4）己糖490测定 （5） 6-脱氧己糖398测定 1.1.7 葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 方法：（1）葡萄糖氧化酶液（110u/ml）：10ml （2）过氧化物酶：25mg溶于14ml水中 （3）联茴香氨：30mg溶于6ml，95%乙醇中 （4）Tris-甘油缓冲液（0.5mol/L，pH7.0的Tris缓冲液加等体积的甘油混合）70ml （5）混合4种成分，总体积100ml （6）2ml样品液加入试管，加入2ml葡萄糖氧化酶试剂，37 ℃水浴反应30min，加入4ml 2.5mol/L的硫酸终止反应，摇匀。 （7）525nm下测定 1.1.8 3，5-二硝基水杨酸法测还原糖 敏感度：5-500ug 葡萄糖的100ul溶液 方法：（1）0.25g 3，5-二硝基水杨酸，75g酒石酸钾钠溶于50ml 2M的氢氧化钠，用水稀释到250ml （2）100ul样品加入1ml （1） （3）加热100 ℃ ，10min （5）冷却至10min，570nm检测 1.2 酸性糖的测定 1.2.1 咔唑法测糖