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第一节 糖的定量测定 1.1 中性糖的测定 1.1.1苯酚-硫酸法 敏感度:1-60ug 葡萄糖的200ul溶液 方法:(1)制备5%的苯酚 (2)样品加入200ul苯酚(样品含有糖不超过100ug) (3)加入1ml浓硫酸 (4)静止10min后震荡混匀 (5)30min后,490nm下测定 1.1.2 Somogyi-Nelson法测还原糖 2Cu2++还原糖 Cu2O Cu2O+H2SO4 cu+ cu+ +MoO2-4 2Cu2+ + 蓝色溶液 敏感度:10-100ug 葡萄糖的1ml溶液 方法:(1)铜试剂A:25g无水碳酸钠,25g四水和酒石酸钾钠,20g碳酸氢钠和200g无水硫酸钠溶解在800ml蒸馏水中,溶解稀释1000ml,20℃以下保存 (2)铜试剂B:配制15%硫酸铜,每100ml溶液中加入1-2滴浓硫酸 (3)砷钼酸盐显色剂:溶解25g钼酸钠在450ml蒸馏水中,搅拌下加入21ml浓硫酸,加25ml砷酸钠溶液,混合后,37 ℃保温24h或55 ℃保温25min。 (4)1ml样品,加入1ml铜试剂(25mlA+1mlB),混匀,沸水加热20min,冷却至室温,加入1ml砷钼酸盐显色剂,蒸馏水稀释至25ml,560nm测定 1.1.3 蒽酮-硫酸法 敏感度:1-60ug 葡萄糖的200ul溶液 方法:(1)2g/L蒽酮试剂:溶解2g蒽酮于浓硫酸 (2)620nm测定 1.1.4 铁-苔黑酚法测定戊糖 敏感度:0.2-20ug 木糖的200ul溶液 方法:(1)10%W/V三氯乙酸溶液 (2)1.15%硫酸铁胺和0.2%苔黑酚的9.6M HCl溶液 (3)200ul样品中加入200ul样品(1),加热100 ℃,15min,冷却室温 (4)加入(2),混合,加热100 ℃,20min (5)冷却室温,660nm测定 1.1.5 苯酚-硼酸-硫酸法(测定酮糖) 敏感度:0.1-9ug 果糖的100ul溶液 方法:(1)2.5g的苯酚溶于50ml水,滴加入1ml丙酮,加入2g硼酸 (2)100ml样品,加入0.5ml试剂(1),加入1.4ml浓硫酸 (3)室温静止5min (4)37 ℃温浴1h (5)568nm下测定 1.1.6 己糖和6-脱氧己糖测定 方法:(1)硫酸试剂:6份硫酸加入1份水中(V/V),冷却 (2)半胱氨酸-苯酚溶液:含1%盐酸半胱氨酸和0.075%苯酚的水溶液 (3)0.25ml样品(2-8ug己糖和6-脱氧己糖)溶液,加入1.25ml硫酸,摇匀,浸入沸水3min,冰浴,加入0.25ml半胱氨酸-苯酚溶液,摇匀冰浴1h (4)己糖490测定 (5) 6-脱氧己糖398测定 1.1.7 葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 方法:(1)葡萄糖氧化酶液(110u/ml):10ml (2)过氧化物酶:25mg溶于14ml水中 (3)联茴香氨:30mg溶于6ml,95%乙醇中 (4)Tris-甘油缓冲液(0.5mol/L,pH7.0的Tris缓冲液加等体积的甘油混合)70ml (5)混合4种成分,总体积100ml (6)2ml样品液加入试管,加入2ml葡萄糖氧化酶试剂,37 ℃水浴反应30min,加入4ml 2.5mol/L的硫酸终止反应,摇匀。 (7)525nm下测定 1.1.8 3,5-二硝基水杨酸法测还原糖 敏感度:5-500ug 葡萄糖的100ul溶液 方法:(1)0.25g 3,5-二硝基水杨酸,75g酒石酸钾钠溶于50ml 2M的氢氧化钠,用水稀释到250ml (2)100ul样品加入1ml (1) (3)加热100 ℃ ,10min (5)冷却至10min,570nm检测 1.2 酸性糖的测定 1.2.1 咔唑法测糖
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