高效液相色谱串联质谱法.pptVIP

高效液相色谱—串联质谱法简介与应用 目 录 高效液相色谱—串联质谱简介 蜂王浆药物残留检测应用实例 高效液相色谱—串联质谱简介 高效液相色谱—串联质谱简介 液相色谱-串联质谱联用技术（LC-MS/MS），以液相色谱作为分离系统，串联质谱为检测系统。样品在液相色谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。 主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；但同气质联用不同，没有商品化的谱库可对比查询。 高效液相色谱—串联质谱仪的组成 （同时也是离子源） 关键技术 接口装置 LC/MS最重要的位置是接口装置。样品经液相色谱分离，进入质谱，要除去溶剂并使其电离，同时要求液相色谱的高流速与质谱的气相和高真空度条件相匹配。 接口的作用就是将被分析的样品分子电离成带电离子，并使这些离子在离子光学系统的作用下汇聚成一定几何形状和一定能量的离子束，然后进入质量分析器被分离。 ESI:电喷雾电离—属最软的电离方式。适宜极性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白质分子多肽等) APCI:大气压化学电离—同上，更适宜做弱极性小分子。 接口装置 质量分析器 质量分析器的分类如上图所示。 进行MS/MS的仪器从原理上可分为两类： ①第一类仪器利用质谱在空间中的顺序，是由两台质谱仪串联组装而成。即前面列出的串列式多级质谱仪。 ②第二类利用了一个质谱仪时间顺序上的离子储存能力，由具有存储离子的分析器组成，如离子回旋共振仪（ICR）和离子阱质谱仪。但不能进行母离子扫描或中性丢失。 质量分析器 液相色谱—联用质谱仪 Agilent 6420?三重串联四极杆液质联用仪 Agilent 500离子阱液质联用仪 蜂王浆药物残留检测应用实例 蜂王浆，别名王浆、蜂皇浆、蜂乳，系工蜂舌腺和上颚腺分泌的乳白色或淡黄色浆状物质。蜂王浆是高蛋白，并含有维生素B类和乙酰胆碱等，成分复杂，有着较强的保健功能。但是近年来，对治疗蜂病的抗生素的滥用，导致蜂王浆产品的质量受到了质疑。氯霉素、磺胺类、磺胺增效剂、氟喹诺酮类、林可胺类、硝基呋喃类、硝基咪唑类、大环内酯类等药物是目前养蜂生产中治疗蜂病的常用药物。 绝大多数药物具有导致过敏反应和使人体产生抗药性等副作用，其中部分具有明显的致癌、致畸、致突变作用，严重影响人体健康。因此多数国家将其作为禁止使用或严格监控的药物。 蜂王浆食品安全现状 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 硝基呋喃类化合物是硝基糠醛的Schiff碱衍生物，为众所周知的一类广谱抗菌药物。研究证明硝基呋喃类药物在脊椎动物体内会迅速分解，其代谢产物的蛋白结合态，残留时间可达数周之久。因此，检测硝基呋喃类药物的代谢产物，更能起到监控作用。 硝基呋喃类药物 代谢物名称 英文缩写 呋喃唑酮 3-氨基2-唑酮 AOZ 呋喃它酮 5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮 AMOZ 呋喃妥因 1-氨基-乙内酰脲 AHD 呋喃西林 氨基脲 SEM 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 液质联用测定条件 色谱条件 色谱柱：Agilent Extended C8 (5 μm, 150 mm × 2.1 mm i.d. )。流动相：A，0.5 mmol/L 醋酸铵水溶液；B，甲醇。梯度洗脱程序：0 ~ 6.0 min，20 % A ~ 60 % A；6.0 ~ 8.0 min，60 % A ~ 60 % A；8.0 ~ 9.0 min，60 % ~ 80 % A；9.0 ~ 9.1 min，80 % A ~ 20 % A；9.1 ~ 10.5 min，20 % A。流速：0.25 mL/min。柱温：室温。进样体积：20 μL。 质谱条件 采用电喷雾离子源（ESI），正离子方式检测；源内诱导解离电压（SID）：10V。 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 4种硝基呋喃类药物的质谱条件 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 蜂王浆中添加4种硝基呋喃类药物代谢物及其相应内标的选择离子监测图 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 总结与评价 在蜂王浆的前处理过程中，有4个因素会影响最后结果的准确性，实验中对其进行了考察。 线性范围、检测限和定量限的考察 精密度的考察 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 4种硝基呋喃类药物代谢物的衍生化效率不同 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 硝基呋喃类药物的代谢物的检测 优点：建立了高效液相色谱—串联质谱测定蜂王浆