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电致化学发光分析 2011年03月14日 电化学发光剂 定义：通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。 特点 反应在电极表面进行 化学发光剂：三联毗啶钌 电子供体为：三丙胺（TPA） 电化学发光原理图 * * 电致化学发光（ECL) 是通过电极对含有化学发光物质的某化学体系施加一定的电压或通过一定的电流，以致产生某种新物质，该物质与发光物质反应并提供足够的能量，使得发光物质从基态跃迁到激发态，再返回基态时能发出光；或者利用电极提供能量直接使发光物进行氧化还原反应，生成某种不稳定的中间态物质迅速分解而导致发光。 是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。 ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制，具有灵活性。 电化学发光法应主要类型和应用 1. 聚芳香族碳氢化合物及有机物的电化学发光 PAH的激发态是在两个电极的阳极氧化产物和阴极还原产物之间反应所产生的。PAH类物质的ECL反应一般必须在无水无氧条件下进行，因为该反应体系在试剂分析测定中的应用很少。 2. 酰肼类化合物 发光效率高，试剂稳定，反应在水相中进行。代表物质：鲁米诺。 3. 无机物及金属有机络合物 可在水溶液中发生，溶液中允许存在溶解氧或其他杂质，在室温下发生，激发电势较低，量子效率高。代表物质：钌联吡啶 4. 氧化物修饰的阴极发光 在含有焦硫酸盐、氧或者过氧化氢的水溶液中，施加较低的电压（10V)，在半导体或者氧化物涂抹的单向导电电极上也能观察到发光现象。 鲁咪咯发光机理 超氧阴离子自由基 钌联吡啶发光机理： 基态 激发态 不稳定 基于电致化学发光的酶生物传感器 酪胺 聚酪胺 聚酪胺-葡萄糖氧化酶 电致化学发光免疫分析 （1）甲胎蛋白（AFP）抗体的标记及其电致化学 发光免疫分析 在碱性条件下，异硫氰酸异鲁米诺(ITCI)分子中的异硫氰基与Anti-AFP中的赖氨酸的自由?-氨基进行硫酰氨化反应形成硫酰胺键，生成发光标记物Anti-AFP-ITCI, The principle of the double antibody sandwich ECL immunoassay 表1 人血清中AFP 的测定结果 样品 ECL法 RIA 法 疾病诊断 1 35.0 30. 肝硬化 2 89.0 93.5 肝 癌 3 58.3 67.2 肝 癌 4 91.0 94.8 妊娠37周 RIA: 放射免疫分析法 四烷氧基锌酞菁（ZnPc(OR)4）在红外光照射下产生单线态氧，光泽精可以探测到单线态氧并与之反应产生强烈的化学发光信号，而加入黄酮类化合物后，由于它们对单态氧的清除作用使化学发光强度得到不同程度的抑制。根据这一性质，可以建立研究黄酮类化合物清除单线态氧构效关系的光敏电致化学发光法（photo-electrochemiluminescence，PECL） 光诱导电致化学发光 光泽精在DMF溶剂中产生超声化学发光现象，并根据黄酮类化合物对该发光体系的抑制作用，建立了黄酮类化合物清除单线态氧的超声诱导化学发光法（sono-electrochemiluminescence，SECL）。可能的机理是DMF在超声后断裂成 ·CH3和 ·CH2N(CH3)CHO，·CH3与溶剂里的溶解氧作用产生ROO·, ROO· 诱导光泽精发光，加入黄酮类化合物后，黄酮类化合物清除ROO· 使发光强度降低。 超声诱导电致化学发光 SECL 的原理 Ultrasonic pressure wave Ultrasonic Transducer Glass Beaker with water HotSpot Acoustic Cavitation Bubbles 已有报道的SCL：鲁米诺在碱性水溶液中的SCL 溶剂的选择　 DMF、二次水，甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醛 量子点的电化学发光 Bard等人在研究有机相中量子嗲的电化学和电化学发光行为时发现半导体纳米晶体可以在一定的电位下被氧化和还原，并且通过一定的湮灭反应导致相应的电致化学发光过程。 氧化态或还原态的量子点可以与溶液中存在的具有氧化或还原特性的物质产生电子转移反应产生发光。