apl白血病多元微球阵列的定量方法分析word格式论文.docxVIP

第 1 章 绪论 优秀毕业论文  PAGE 58 精品参考文献资料 第 1 章 绪论 自从1959年Berson和Yalow创立放射免疫分析（RIA）法[1]之后，相继出现了众多类 似的检测方法，从而逐渐形成了一种新的临床诊断方法——医学实验室诊断方法，使某 些临床诊断由常量分析向微量分析的转变，由定性分析转变为定性基础上的定量分析。 之后出现的免疫分析技术也将放射性改变成为了非放射性免疫分析，形成了一套简单明 了同时又行之有效的医学临床检验方法。 临床实验室诊断分析方法所使用的仪器种类繁多，如分光光度仪、色谱仪、质谱仪、 酶联反应仪、电泳仪、流式细胞仪等众多种类，这些仪器的出现使得临床实验室诊断更 加的简便而且精确[2]。精密的仪器配合适当的诊断方法，就可以更加系统地检测疾病， 达到早发现、早诊断、早治疗的目的。目前各种诊断方法已经越来越被人们重视，尤其 是其中的定量分析方法，根据其检测的原理，又可将其大致分作生化分析、核酸分析以 及免疫分析等方法。各种检验方法彼此不是独立的，虽然被分作各种种类，但是彼此之 间是相互交叉的，后两种的技术支持大多都是生化分析的原理，而且有些分析技术同时 覆盖核酸分析和免疫分析技术，所以这些检测方法并不是彼此分隔的。 1.1 基础生化分析技术 光度检测法 物质在经过光照射后，可以吸收能量、散射能量，通过检测其吸收散射后的能量与 入射光的能量对照，可以定量检测样本。 比色法 比色法用于测定有色物质。有色物质显现颜色是由于其吸收了一部分可见光的光 能，而其吸收的能力与颜色的深浅有关，同时颜色深浅与溶液浓度有关，浓度大则颜色 深，浓度小则颜色浅，从而通过检测吸收光的程度就可以有效地计算出溶液浓度。 在同一大小的比色皿中，根据测定的未知浓度的溶液吸光度 D2 及已知浓度 c1 溶液 的吸光度 D1，可以得到未知浓度 c2，其公式如下：  c2 = D2 × c1 D1  （1）  比色法虽然操作简便，但是只针对有色物质，限制了诊断的范围，同时仪器、操作 人员以及方法本身就存在很多的误差，造成检测的不准确，比如滤色片的波长不准确， 通???波带过宽，都将使标准曲线的斜率降低或不呈线性。  (2) 分光光度法 分光光度法[3]的理论基础也是利用被检测物质吸收了入射光的能量，从而可以依靠 检测入射光能量的变化，定量检测样本。根据入射光的不同种类，分光光度法可以分为 紫外分光光度法和可见光分光光度法，而被检测物质吸收的入射光能量转化为自由基态 到激发态的能量。 分光光度法已经在诸多检测领域得到应用，但是其检测得到的灵敏度的精确度还是 很低，这来源于仪器的限制，比如电源的选择、电源电压的稳定性、单色器材料以及最 后光强的读数刻度等。为了能得到较精确的灵敏度，可以根据检测材料不同，通过严格 控制检测环境以及优化各个配件材料来实现，一般此灵敏度为 10-7g/mL。 (3) 荧光分析法 荧光分析法就是针对具有荧光特性的样品进行检测的方法。荧光是物质在吸收了一 定入射光光强后，使其原子表面由基态激发到激发态，激发态不稳定又从激发态转回基 态，将能量释放出来，这种光称为荧光。所以荧光分析法首先要存在一定光强的入射光， 恰好能激活荧光，而且要在侧面检测荧光的散射光。 其检测分析的过程与分光光度计检测相似，但是所得溶液浓度与荧光强度和入射光 强度的比率成线性关系，这种线性关系出现在低浓度的检测液中，浓度增大后，物质内 部光强相互吸收，影响了荧光值的准确性，这也限制了荧光分析法的应用范围。不仅溶 液浓度会影响到荧光分析法检测的精确度，检测的溶剂、激发光的变化、温度的变化等 都会影响到检测的结果，因此用此方法进行检测时要保证溶剂干净无杂质，同时不要影 响到样本的荧光度，注意避光。荧光分析法检测的灵敏度可以达到 10-10g/mL，比分光 光度还要精确很多。 (4) 散射测定法 散射测定法利用的是颗粒物质均匀分散在液体中，对光线散射后，通过透过光强度 与散射光强度进行检测的一种方法。根据两种测定方式，可以把这种方法分为比浊法（测 定透过光与入射光强度比值）和散射浊度法（散射到侧面的光与入射光强度比值）两种 方法。这种方法增大了检测物质的种类，只要将检测物质悬浮于特定溶液中，就可以进 行检测，而且检测也比较灵敏，但是散射测定法也有一个很大的弊端，就是特异性差， 同时还要求被检测的样本大小均一，性质稳定，所以在实际临床检验中应用较少。 层析法 层析法中首先具备流动相与固定相两种物质，样本在通过其中时，利用样本在两相 中的物理化学性质不同而进行分离检测。根据流动相的不同，一般分作液相层析和气相 层析两种，但是具体到其实验材料上，还会分作众多种类。 (1) 薄层层析法 因其将固定相均匀涂布到玻璃板等载体上形成一