armillariella tabescense20cdna文库部分克隆随机测序及阿拉伯糖苷酶全长cdna的克隆与表达word格式论文.docx

暨南大学硕士学位论文、、一，’刀允力妇，’，，一，，，，，朽妇一，’，行朽触已拍勿矛刃一，，七内厂一一一月匕’内暨南大学硕士学位论文行妇伯，，，尸七力’，暨南大学硕士学位论文目录摘要… ……… 工工第一章绪论· · · · · · · · · · · · · ·……，研究的意义及思路… …文库克隆随机测序的原理… …生物信息学的应用… …、表达序列标签的意义… …、核酸序列氨基酸序列蛋白质结构和功能预测的分析… …阿拉伯糖普酶的简介… …阿拉伯糖营酶的分类与性质… …阿拉伯糖普酶的研究进展… … 巧阿拉伯糖普酶的应用… …由到全长的基因克隆策略… …酵母菌表达系统的简介… …，酵母表达系统的优缺点……… …巴斯德毕赤酵母表达系统… …第二章实验设备及材料… …，主要仪器设备… …二实验材料… …菌种及载体… …酶类… …试剂盒… …常用试剂… …、培养基……… …试剂与母液配制… …第三章一文库部分克隆的随机测序… …一前言… …暨南大学硕士学位论文实验方法… …部分文库铺平板… …随机挑选个克隆转换克隆的形式… …测序… …，测序结果的初步分析……… …结果与讨论… …测序结果… …，同源性分析结果二… …第四章全长的克隆及其在毕赤酵母中的表达… …全长的克隆和信息学分析… …菌一的培养… …，总的提取…… …’……的生物信息学分… …毕赤酵母系统表达目的蛋白… …，一一重组子在酵母中的表达……… …带组胺酸标签的重组子一在酵母中的表达… …阿拉伯糖普酶的酶学性质分析… …结果与讨论… …总提取的结果… …，的结果… …的生物信息学分析… …，重组子工一一在中的表达结果………重组子一在巧中的表达结果… …阿拉伯糖普酶的酶学性质分析结果… …第五章讨论· · ··· · · · · ·……文库克隆随机测序… …阿拉伯糖营酶全长的分析… …生物信息学分析… …暨南大学硕士学位论文序列比对分析… …的信息学分析… …影响目的蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素… …外源基因在酵母中表达产物的分泌… …外源蛋白的酶解… …宿主菌及载体的选择… …密码子… …，发酵条件的优化…………影响目的蛋白活性的因素… …阿拉伯糖昔酶的酶学性质分析… …结论及展望… …英文缩略词表… …参考文献… …攻读硕士学位期间发表论文… …致谢… …暨南大学硕士学位论文第一章绪论研究的意义及思路，，，。假密环菌二了了夕万一召改为白磨科真菌含假密环菌甲素、、，，，乙素丙素及甘露素寄生于朽木具有较强的分解利用纤维素的能力菌体可食用‘ 。，有报道菌丝体可用于治疗急性胆囊炎慢性胆囊炎急性发作急性传染性肝炎迁延，性肝炎慢性肝炎〔〕其含有的杂多糖组分体外实验证实能抑制小鼠肿瘤的生长，，和增强巨噬细胞的活性〔本实验组对该菌属对霉菌毒素如黄曲霉毒素的解毒作。一。用有深入的研究〔黄曲霉毒素是某些黄曲霉属真菌的次级代谢产物其中黄曲霉毒，素具有很强的毒性和致癌性对人类和动物危害极大〔，本研究组从假密环菌一，，。一中分离出黄曲霉毒素解毒酶〔这种生物酶解毒法具有其特有的专，一性和催化性能够达到安全有效的解毒目的具有很好的研究和应用前景为了深，入的研究和开发该菌本研究利用技术构建了载体为人的该菌的表达一，。型文库〔川对文库部分克隆的表达序列标签进行随机测序和生物学信息分析〔一’ ，发现序列与多形拟杆菌的阿拉伯糖营酶序列有很高的序列一致性、。运用生物信息学方法进一步分析了此序列的核酸氨基酸序列蛋白的二级结构和功、，，能预测超家族分析显示此序列属于一一本研究利用一，技术成功获得了序列的全长开放阅读框分析序列有一个长，，编码个氨基酸的完整编码框成功构建了重组质粒一一并在毕。赤酵母菌中进行了初步表达和活性检测文库克隆随机测序的原理。，。本实验中文库的构建应用了插入型载体外源的克隆到插入型的人载，体分子上会使一些噬菌体的某种生物功能丧失效力即所谓的插入失活效应根据，插入失活效应的特异性插入型的入载体又可以进一步区分为免疫功能失活的和大肠。杆菌一半乳糖昔酶失活的两种亚型本实验中所应用的一属于一半乳糖普，酶失活的插入型载体他们的基因组中含有一个大肠杆菌的区段其中存在编暨南大学硕士学位论文，，码着一半乳糖昔酶基因由这种载体感染的大肠杆菌一指示菌涂布在含有。，，，和的培养基平板上会形成蓝色的噬菌斑但在克隆过程中如果外源，，。插入到区段上阻断了一半乳糖昔酶基因的编码序列那么由这种人重，，组体感染的一指示菌由于不能合成一半乳糖昔酶只能形成无色噬菌斑在实，验中若是使用大肠杆菌菌株作指示菌那么在没有外源插入的情况下人载，。体区段保持完整感染的结果会形成深蓝色的噬菌斑就是区段被插入阻，，断也会形成浅蓝色的噬菌斑而不是无色的噬菌斑实验中所用的没有类，似于一的这种特性所以要先用一对入文库基因片段的插入与否