bhas42细胞转化试验方法学及其应用分析word格式论文.docx

μg·ml-1 时相对生长率接近 50%。促癌试验细胞接种浓度为 400 cells·well-1、TPA 浓度为 50 ng·ml-1 时相对生长率接近 100%。按以上条件进行以细胞灶法判定结 果的细胞转化试验，3-MCA 和 TPA 组转化灶个数通过卡方检验（p0.01）均相 对于对照组有显著性差异。2）通过 Balb/c 3T3 细胞转化试验，CCK-8 染色 4 h 后 OD 值基本达到平稳，各浓度组之间差距也较明显。第 5 组细胞中 0.0012%和 0.0020%的 H2O2 处理的阳性组的 OD 值均高于阴性组。通过 Bhas 42 细胞转化试 验对 H2O2 浓度进一步优化，当 H2O2 浓度为 0.0016%时，阳性组与阴性组之间的 差异最大，且阳性组存活率较高。3）ENU 在启动试验中有 10、100、150 μg·ml-1 三个浓度组相对于对照组有显著差异，且有两个为连续浓度。PDD 在促癌试验 中 0.05、0.1、0.2、0.3、0.4 μg·ml-1 五个浓度组相对于对照组均有显著差异。 LCA 在促癌试验中有 5、8、12 μg·ml-1 三个连续浓度组相对于对照组有显著差 异（Dunnett-t test, p0.01）。4）在启动试验中，GEN 和葛根素的各个浓度组相对 于对照组均无显著性差异。在促癌试验中，GEN 有 0.03、1、3 μg·ml-1 三个浓 度组相对于对照组有显著性差异，且有两个为连续浓度。葛根素只有 3 μg·ml-1一个浓度组相对对照组有显著性差异。5）在启动试验中，没食子酸乙酯仅 1 μg·ml-1 一个浓度组相对于对照组有显著性差异。而在促癌试验中，没食子酸乙 酯浓度为 0.1 μg·ml-1 时相对于对照组有差异，1、3 μg·ml-1 时相对于对照组有显 著性差异。在启动试验中，甜蜜素浓度为 30 μg·ml-1 时相对于对照组有差异。在 促癌试验中，甜蜜素浓度为 10μg·ml-1 时相对于对照组有差异，浓度为 30、300、 1000μg·ml-1 时相对于对照组有显著性差异。3、 结论1）试验选用批号为 737443 的胎牛血清。启动试验细胞接种浓度为 200cells·well-1、3-MCA 浓度为 1 μg·ml-1，促癌试验细胞接种浓度为 400 cells·well-1、 TPA 浓度为 50 ng·ml-1 进行的以细胞灶法判定结果的细胞转化试验，3-MCA 和 TPA 组均表现为阳性，证明该方法在本实验室建立成功。以 H2O2 法判定结果的 Bhas 42 细胞转化试验采用浓度为 0.0016 %的 H2O2，在第 19 天处理细胞 24 h， CCK-8 染色 4 h 后在 450 nm 下测定 OD 值。三种已知致癌物进行验证，均得到 阳性结果，验证了该方法的可靠性和准确性。4）根据 GEN 和葛根素的细胞转化试验，GEN 在启动试验中表现为阴性，而在促癌试验中表现为阳性，表明 GEN 可能为非遗传毒性致癌物。葛根素在启动试验中为阴性，在促癌试验表现为可疑结果，表明葛根素的非遗传毒性是可疑 的。5）根据没食子酸乙酯和甜蜜素的细胞转化试验，没食子酸乙酯和甜蜜素均 在启动试验中表现为可疑的，但在促癌试验中均为阳性。表明没食子酸乙酯和甜 蜜素的遗传毒性是可疑的，可能是非遗传毒性致癌物。关键词：细胞转化，Bhas 42 细胞，非遗传毒性，致癌性，H2O2AbstractMost of the short-term genotoxicity tests confine to the detection of genotoxic carcinogens, but cannot detect non-genotoxic carcinogens. Its significant to set up a quick, simple and reliable in vitro method for screening non-genotoxic carcinogens in the early stages of research and development of drugs, and its the key issues in the current study on safety evaluation of toxicology.We usually judge the results by focus formation method which is time-comsuming and subjective. The study is based on focus formation method to establish Bhas 42