brn3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究word格式论文.docxVIP

目录缩略语表…………………………………………………………………………….3中文摘要…………………………………………………………………………….4英文摘要…………………………………………………………………………….6前言…………………………………………………………………………….8材料与方法………………………………………………………………………….9结果…………………………………………………………………………….14讨论…………………………………………………………………………….21结论…….………………………………………………………………………27参考文献…….………………………………………………………………………28致谢…….………………………………………………………………………31综述…….………………………………………………………………………322英文缩略词表英文缩写DAB英文全称diaminobenzidine中文全称二氨基联苯胺ESCembryonic stem cells胚胎干细胞株GCLGFAPganglion cell layerglial fibrillary acidic protein神经节细胞层胶质纤维酸性蛋白HEHSP27haematoxylin -eosinheat-shock protein 27苏木精-伊红热休克蛋白 27INLinner nuclear layer内核层NF NF H+L NSEONLneurofilament neurofilament- H+Lneuron specific enolaseouter nuclear layer神经微丝 神经微丝H+L神经特异烯醇化酶外核层、感光细胞层POUPit-Oct-Unc and Unc-85POU 家族PBSRGCsphosphate buffered salineretinal ganglion cells磷酸盐缓冲液视网膜神经节细胞SNAPSYsynaptosome-associated proteinsynaptophysin突触小体相关蛋白突触素3Brn-3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究中文摘要目的对比 Brn-3a 与 Thy-1.1 标记大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的特点及计数差异，评估 Brn-3a 是否可作为一种可靠的内源性标记物，标记并计数大鼠 RGCs。 方法20 只 SD 大鼠，随机选取大鼠一眼为 Thy-1.1 组，另一眼作为 Brn-3a 组, 过 量麻醉处死，行 3 点钟位缝线标记,立即摘除眼球，浸泡于 4%多聚甲醛的固定液 中。48 h 后沿角巩膜缘切除眼前节，剥离晶状体，余下部分逐节脱水、透明、石 蜡包埋，于视乳头颞侧旁开 1mm ，做 4μm 切片，烘干备用，做视网膜石蜡切 片，常规苏木素-伊红染色镜下观察 RGCs 的形态，运用免疫组织化学法检测 Brn-3a 与 Thy-1.1 的表达情况，每只眼球取 1 张切片，在每张待测视网膜切片上， 以视网膜后极部中点为起点，至近角膜缘视网膜止点处，将视网膜分为三等份， 即中央区、中间区及周边区，每个区域视网膜随机取 5 个高倍视野，分别计数 Thy-1.1、Brn-3a 阳性细胞均数。结果光镜下正常大鼠的视网膜从 内向外依次为神经节 细胞层(GCL)、内核层 (INL)、外核层(ONL)。GCL 的细胞呈单层排列，较为整齐，胞核清楚数目相对 较少，INL 和 ONL 呈多层排列，且细胞排列紧密，数目相对较多。两种标记物 染色都仅仅存在于视网膜的 GCL，但在大鼠 RGCs 中分布呈明显差异：Brn-3a 主要在胞核中着色，Thy-1.1 主要在胞浆中着色；运用此两种标记物标记计数 RGCs, 中央区 Thy-1.1 组(n=20)和 Brn-3a 组(n=20)分别是 29.75 ??2.02（个/高倍视 野）和 29.46 ??1.25（个/高倍视野），中间区 Thy-1.1 组(n=20)和 Brn-3a 组(n=20) 分别是 24.72 ??1.10（个/高倍视野）和 24.43 ??1.66（个/高倍视野），周边区 Thy-1.1 组(n=20)和 Brn-3a 组(n=20)分别是 21.79 ??1.25（个/高倍视野）和 21.84 ??1.37（个/高倍视野）, 各个相同区域内 Thy-1.1 和 Brn-3a 阳性细胞计数比较，差异均无统 计学意义（P0.05)。Thy-1.1 组中央区、中间区和周边区两两比较，差异均有统 计学意义（P 0.05），Brn-3a 组中央区、中间区和周边区两两比较，差异均有统 计学意义（P 0.05）。4结论在大鼠视网膜中 Brn-3a 阳性细胞仅存在于视网膜的 GCL，主要在胞