ctla4ig联合青藤碱对异种鼠肾移植排斥反应中fasfasl表达的影响word格式论文.docxVIP

南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材 料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意 识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。 本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人 同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论 文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它 手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论 文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数 据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录 到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位 论文，解密后适用该授权。作者签名：年月日导师签名：年月日CTLA4Ig联合青藤碱对异种鼠肾移植排斥反应中Fas/FasL表达的影响摘 要:目的本实验主要利用 PLNCX2-FLAG-CTLA4Ig 基因包装成逆转录病毒局部转染豚 鼠肾脏，通过其表达产生的 CTLA4Ig 阻断 CD28-B7 共同刺激通路,营造免疫抑 制微环境，同时联合应用青藤碱抑制受鼠外周血 CD4+T 细胞增殖，通过研究 两者的协同作用探究其对异种鼠肾移植排斥反应中相关凋亡因子 Fas/FasL 表达的影响，从而为临床治疗肾移植排斥反应及未来异种肾移植的临床应用 提供新的方法和思路。方法选用雄性 SD 大鼠（12-14 周龄）、雄性豚鼠（12-14 周龄）各 40 只，完全 随机分为 4 组（每组 SD 大鼠、豚鼠各 10 只）。实验分为 4 组，A 组：空载 体逆转录病毒基因转染+生理盐水空白对照；B 组：空载体逆转录病毒基因转 染+青藤碱；C 组：CTLA4Ig 逆转录病毒基因转染+生理盐水；D 组：CTLA4Ig 逆转录病毒基因转染+青藤碱。手术方式为先通过逆转录病毒载体将 CTLA4Ig 基因局部转染到豚鼠双肾，再将豚鼠双肾整体异位移植到 SD 大鼠颈部，其中 左肾留作移植肾，切下右肾用于检测 CTLA4Ig 的表达。观察术后各组 SD 大鼠 移植肾存活时间、受鼠存活时间；采用 HE 染色观察术后各组 SD 大鼠移植肾 排斥反应病理分级；术后 48 小时受鼠尾静脉抽血查肌酐值，同时监测 48 小 时尿量；采用 Western blotting 检测被切右肾 CTLA4Ig 的表达；Western blotting 及免疫组化技术检测受鼠移植肾 Fas/FasL 蛋白的表达。I结果1.肌酐及尿量的监测术后 48h 尾静脉抽血查肌酐值：B、C 组移植鼠肌酐值分别为（9.20±0.83） mg/L、（9.00±0.71）mg/L，明显低于 A 组（15.00±1.00）mg/L（P0.05）， 而 D 组移植鼠肌酐值最低，为(4.20±0.84)mg/L，与其他 3 组相比差异有显 著性（P0.05）。术后 48h 尿量值：B、C 组移植鼠尿量分别为（11.80±1.09）ml、（11.60±1.14）ml，明显高于 A 组（6.40±0.55）ml（P0.05），而 D 组移植鼠尿 量最多，为（19.20±0.81）ml，与其他 3 组相比差异有显著性（P0.05）。 2.移植肾及受鼠存活时间A 组大鼠移植肾存活时间为（5.60±0.89）d，受鼠的存活时间为(6.50± 0.87)d；B 组、C 组移植肾存活时间分别为(10.45±0.85)d、（10.85±0.80） d ；受鼠存活时间为(12.40±0.86)d、（12.80±0.81)d ，均长于 A 组（P0.05)，其中 D 组移植肾及受鼠存活时间最长，分别为（14.80±0.85）d 及（17.75±0.87）d。D 组与其他 3 组比较，差异均有统计学意义（P0.05)。 3.HE 染色各组移植肾病理切片 HE 染色检查结果示：术后 A 组移植肾组织 HE 染色可 见大量淋巴细胞浸润，Banff09 移植肾病理分级为 IIB-III 级，提示移植肾 排斥反应强烈。B、C 组移植肾也可见淋巴细胞浸润，但表达强度低于 A 组， Banff09 移植肾病理分级为 IIA-III 级。而 D 组移植肾仅有少量淋巴细胞浸 润，Banff09 移植肾病理分级为 IA