dapt抑制notch信号通路对前列腺癌骨转移瘤rm1细胞增殖 凋亡及化疗敏感性影响的研究word格式论文.docxVIP

目录缩略词…………………………………………………………………………………4 中文摘要………………………………………………………………………………5 英文摘要………………………………………………………………………………7 引言……………………………………………………………………………………9第一部分DAPT 对前列腺癌骨转移瘤 RM-1 细胞增殖、凋亡及化疗敏感性影响 的体外试验材料方法…………………………………………………………………………… 10结果………………………………………………………………………………… 21讨论………………………………………………………………………………… 27第二部分 DAPT 对前列腺癌骨转移动物模型肿瘤生长及化疗敏感性影响的体内 实验材料方法…………………………………………………………………………… 31结果………………………………………………………………………………… 34讨论………………………………………………………………………………… 36全文结论…………………………………………………………………………… 38参考文献…………………………………………………………………………… 39致谢………………………………………………………………………………… 43综述………………………………………………………………………………… 443缩略词SREs：Skeletal Related Events骨相关事件RM-1：小鼠前列腺癌细胞DAPT:N-[N-(3,5-Difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl esterγ-分泌酶抑制剂PBS：Phoshate Buffered Saline磷酸盐缓冲液NICD：Notch Intracellular DomainNotch 胞内区DMSO：Dimethy Sulfoxide二甲基亚砜MTT：3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide噻唑蓝FBS：Fetal Bovine Serum胎牛血清OD：Optical Density光密度Tris：2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol三羟甲基氨基甲烷FCM：Flow Cytometry流式细胞术IC50：Half Maximal Inhibitory Concentration半抑制浓度PI：Propidium Iodide碘化丙啶SPF：Specific Pathogen Free无特定病原体ADM: Adriamycin阿霉素4DAPT 抑制 Notch 信号通路对前列腺癌骨转移瘤RM-1 细胞增殖、凋亡及化疗敏感性影响的研究 中文摘要目的：1、 以小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞为研究对象，利用γ-分泌酶抑制剂DAPT 抑制细胞Notch信号通路，观察其对RM-1细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的 影响。2、构建前列腺癌骨转移的动物模型，探讨生理状态下DAPT对转移性骨肿瘤生 长及化疗敏感性的影响。方法：1、实验组以不同浓度DAPT（0.25、0.5、1、2、5μmol/L）处理RM-1细胞后， 利用MTT法、流式细胞术观察其对RM-1细胞增殖、周期的影响，Tunel法检 测细胞凋亡，RT-PCR、Western blot方法分析细胞中Notch1、Jagged1表 达的变化；不同浓度阿霉素（1、2、4、6、8、10μg/ml）单用或联用DAPT（1μmol/L）处理RM-1细胞，利用MTT法比较单用或联用DAPT时阿霉素对 RM-1细胞的半抑制率IC50值。2、 采用左胫骨近端髓腔注射RM-1细胞方法建立前列腺癌骨转移动物模型，3 周后利用X线、三维CT重建、HE染色等方法评价模型；并将模型随机分为 空白对照组、DAPT组、阿霉素组、阿霉素联用DAPT组，各组予对应处理4 周后，处死小鼠并剥离肿瘤组织称湿重。结果：1、与对照组比较，实验组中0.25μmol/L DAPT组对RM-1细胞增殖、周期、凋 亡、以及Notch1、Jagged1表达均无明显影响（P0.05）；实验组中0.5、1、 2、5μmol/L DAPT组均能明显抑制细胞增殖、诱导细胞G0/G1期阻滞、促 进凋亡以及下调Notch1、Jagged1表达（P0.05），且呈剂量依赖性。阿 霉素单用时IC50值为(6.25±0.38)μg/ml，阿霉素联用DAPT时IC50值为 (3.25±0.52)μg/ml。52、左胫骨髓腔注射RM-1细胞3周后，X线、三维CT重建显示骨质破坏；解剖后见左胫骨近端骨质疏松，局部有 “鱼肉”样组织突出髓腔，并与胫骨周 围肌肉组织粘连