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DMD/BMD 缺失基困的检测及其表达产物病理学研究摘要口的z 进行性肌古养不良(progressive muscular dystrophy，PMD) 是- IIJ后发于肌肉组织的遗传性变性病，以ill行性加重的骨锵iVI 无力、萎缩为主要表现。其中Duchenne 假肥大型Jjlt营养不良(Duchenne muscular dystrophy，DMD) 最常见，且病情最为严重，属X 连锁隐性遗传，出性发梢，女性为携带者。忠者多在儿童期发病，起呐!自袭，进展缓慢。开始常表现为不能奔跑，易跌倒，纱iTI?HH见鸭步，Gowers ?il:fl日性。90%伴有JJíI肠肌假性肥大。口j有心脏受累及智力阵问。随着病情进展，多数在15 岁以前即;需以轮椅代步，般在25 30 岁之前死于呼吸道感染、心力衰竭或慢性iìí耗性疾病。Becker假肥大型肌营养小也(Beckermusculardystrophy，BMD)与DMD类似，们赳州较晚(多在12岁以后)，病情相对较轻，预后较好，义称为良性型。DMDIBMD患者血清酶活性明显增高，尤以CK监为敏感。肌电问示典型的肌源性损害。基本病理改变t要是肌纤维变怕、坏死、再岳。DMD/BMD的病因和发梢机制极为复杂，f41有许多学说，但均认为与基因异n.有关。现经研究证明，DMDIBMD 是由于X 染色体上缸喃LXp2J.1_Xp22.J序列基因缺陷导致肌纤维膜上抗肌营养个良蛋白(dystroph i n )合成障碍，进而引起肌细胞膜功能外常，使大量的游肉Ca2+、高i:f(皮的细胞外液进入肌纤1ì内，引起线收休机赳棋，激I币月也浆1的蛋白酶，最终使JjJL纤维变性、坏化。l1.êif米，IIIT分子生物学技术在|陆iJ木的f泛应剧，对旦(情基|刻的直接检测为临床确诊DMD/BMD 提供了口Hi侦据。Dystrophin基因是目前已知的人类最大的基因，结构复杂，突变束l旬，突变形式多样。其巾，基因缺失Ilí55-65%，基因币;复Ilí5-10%，其余25-35% 为点突变或微小缺失、插入等，给基国检测带来f1L大1;}1难。DMD基比|缺失的分布存着两个明显热点区域，HIJ5端缺失热区和/11央缺失热区。随着聚合酶链反应(PCR) 技术的成熟和发展，人们根据以IA!J点，设计了多对1)1物对该)J;iJ4ill1J多rTl:PCR检测，从而λJDMD/BMD且Ià1检测提供f 和|币!但、快速、准确的诊断jJ法。抗肌U养不ltf_蛋臼(dystrophin)是DMD基剧的结Wb产物，在保护Wl细胞结构元整，纷问肌细胞正常功能11国着重要的作川J0 Dystrophin求达异111.是DMD/BMD 的基本病理基础，构训dystrophin非常有WJ =rDMD/BMD ;如Jì机制的研究和恪圳i合断。由于DMDIBMD 至今尚无有效的治疗措施，提;\6Jrr乡断率和携带，者检出率非常重要，国此，DMD基l大|及Ht:肌营养不良蛋f 11王受到国内外学者越米越多的关柱。本课题应用多重PCR 技术和免疫荧光染色方法对DMD/BMD 忠者的基1)、1/生其产物进行检测，以了解外显于缺失分布情况，同时对:1\者IlJL细胞rl--f]L肌47养不良蛋白的农达i址:行分析，进}_乒U川十楝宋t川、H其L与l临恼b川冰f十d梢岗，如怦怕V悄行!与i的犬系以及在DMD/BMDt诊拿H即f百惭[叶川的主立.:(j力-r法尘:本研究共分内部分。Yt:.I}:2.4. JCrll 1例DMDiJ.\ 吕-米检1+.1，基因缺失，但dystrophin染巳|别性。结论:本i黑题应川多重PCR 技术及免疫荧光抗体染缸Ji1);.对DMD/BMD V失基[2;1及其表达/物近行研究，得lli如F结论:1.DMD/BMD基因缺失主要分布于，tlj，;缺失热区，5端缺:k.热以相对较少，其rl以外显子44 49;豆累最常见，与文献报道一致:2.i却自悄悄轻重可能与基因缺失的数量和片段大小不呈千千ìk.系，而是与外显子的缺失类型有关，有待于进一步研究:3. 到〔病基因的表达受个体差异的影响，相同基因位点的突变IIJ%.I]不|司的l恼休农型，不同的基|大p且又叮引起相似的|陆比JU1月，世IJ边il立的iili千奇异服性:4. JiL)J)L营养不良蛋白缺乏或表达异常是边成DMD/BMD求用的基本生化I素。拍，肌营养不良蛋白缺乏所引起的临床)8*，不仅取决于其缺失程度，还取决于其缺失区域的功能在义。5. }但m免疫荧)(;抗体*色:h?l:检测抗Wl营养不良蛋白，千助CfDMD和BMDI的确诊及鉴别诊断。关键括毛