第八章高效液相色谱各种方法及应用.pptVIP

* * 第八章 高效液相色谱各种方法及应用 8.1 离子对色谱法 （1） 基本概念 离子对色谱是一种特殊的液－液分配色谱， 将一种（或多种）与溶质分子电荷相反的离子 （对离子或反离子）加到流动相或固定相中， 与溶质离子结合形成离子对化合物，从而改变 样品离子在两相中的分配，使离子性溶质保留 行为和选择性发生显著变化。 根据固定相和流动相的极性，可以分为正相 离子对色谱和反相离子对色谱。 正相离子对色谱 固定相：含有离子对试剂的水溶液涂于硅胶载 体上。 流动相：有机溶剂 形成的离子对进入流动相，未配对的仍留 在水中。 反相离子对色谱 固定相：非极性疏水键合相（如C8，C18） 流动相：加入对离子的极性溶液（如：甲 醇－水） 形成的离子对被疏水固定相分配或吸附， 按照作用力的大小被流动相洗脱。 平衡离子 （对离子） 酸性样品：有机碱 碱性样品：有机酸 （2）分离过程 以应用广泛的反相离子对色谱为例。 固定相 流动相 样品 离子对 分配平衡 Y- Y- Y- Y- + X+ X+ X+ X+ X+Y- X+Y- X+Y- X+Y- X+Y- X+Y- X+Y- X+水相 + Y-水相 X+Y-有机相 样品 平衡离子 离子对 8.2 离子色谱 离子色谱是20世纪70年代发展起来的一项 新的液相色谱技术，是离子交换色谱的一种特 殊形式。 固定相：离子交换树脂 流动相：电介质溶液 检测器：一般为电导检测器 离子色谱仪 离子色谱仪柱室内部 （1） 双柱离子色谱 淋洗液→泵→进样器→分离柱→抑制柱→电 导检测器→记录仪 通过抑制柱除去流动相的电解质背景，只有被检 离子在检测器上产生讯号。 例：以阴离子交换树脂为分离柱，阳离子交换 树脂为抑制柱，NaHCO3为流动相，分离　　　　F- 、Cl-混合液。 交换： 洗脱： 抑制柱： 弱电导 检测 为保证交换平衡迅速达到，必须使用低交换容量树脂。 　　抑制柱要定期再生，较麻烦，且谱带在抑制柱中又会产生扩散。 （2） 单柱离子色谱 特点 { ①采用更低交换容量的树脂 ②采用极低浓度的低电导洗脱液 ③采用差示电导检测器。 （用参比电池扣除流动相的本底 电导。） 应考虑 单柱法中最重要的问题是洗脱液的选择 样品组分的分离 分析灵敏度及检测限 优点：① 减少因抑制柱而引起的峰扩散 ② 省略抑制柱的再生和更换 ③ 仪器简单 缺点：① 灵敏度较低（不能完全扣除流动相 背景） ② 试样总离子强度不能过大 8.3 分子排阻色谱 分离原理：按分子体积大小进行分离。 固定相：惰性多孔凝胶（渗透在微孔中的溶剂） 　　分配过程并非在“两相”分配，而是在不同位置的同一种液体中相互渗透。 渗透系数 A以上的大分子——完全不能进入微孔，全排除。 　　　　　VR=V0　　 K0=0 B以下的小分子——完全可以自由进入微孔，全渗透。 　　　 　VR=V0+Vl 　 K0=1 A～B之间： 按大小可以进入部分微孔。 大者有效体积小，快流出； 小者有效体积大，慢流出。 VR=V0+VsV1+Vl K01 ∴0≤K0≤1 *