eb病毒对wif1基因甲基化和表达影响的分析word格式论文.docx

EB 病毒对 WIF1 基因甲基化和表达影响的研究中文摘要EB 病毒(Epstein-Barr virus, EBV)为嗜淋巴细胞病毒属的 DNA 肿瘤病毒，EBV 感染与部分胃癌发生 的关系已经确认， EBV 相关胃癌 (EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC) 约占胃癌总数的 10%。EBVaGC 发生的表观遗传学机制的研究 主要涉及 EBV 感染对抑癌基因启动子区甲基化的影响，以及 EBV 非编码 RNA 对宿 主基因表达调控作用两个方面。目的 明确 EBV 感染对 Wnt 抑制因子 1(Wnt inhibitory factor-1, WIF1)编码基因 启动子区甲基化以及 EBV 编码 miRNA BART19-3p 对 WIF1 表达的影响，为进一步 探讨 EBV 抑制 WIF1 表达，进而异常激活 Wnt 原癌基因通路参与 EBVaGC 发生发 展的作用机制提供实验基础。方法 选取 2 种 EBV 阳性胃癌细胞系 GT38、GT39 和 3 种 EBV 阴性胃癌细胞 系 HGC-27、MKN-45、SGC7901 作为研究对象，采用实时荧光定量 PCR (Real time quantitative PCR, real time qPCR)检测上述细胞系 WIF1 表达水平，亚硫酸氢盐基因 组测序法(Bisufite genomic sequencing, BGS)检测 WIF1 基因启动子区甲基化状态。并 分别采用 5-Aza-CdR、BART19-3p 模拟物以及抑制物作用 EBV 阳性胃癌细胞系 GT38 和 EBV 阴性胃癌细胞系 HGC-27，检测药物作用前后 2 种细胞系 WIF1 和 β-catentin 表达水平的变化以及细胞增殖情况。结果 ①BGS 检测结果结果显示，5 种胃癌细胞系 WIF1 启动子区均呈高甲基化 状态，甲基化率均在 85%以上。②real time qPCR 结果显示，胃癌细胞系中 WIF1 表 达普遍下调，以 EBV 阳性细胞系 GT38 和 GT39 下降更为明显；5-Aza-CdR 作用后 GT38 和 HGC-27 两种细胞系 WIF1 表达均上调，其中 HGC-27 上调更为显著；同时， Western Blot 显示两种细胞系 β-catenin 水平均下调。③EBV 阴性细胞系 HGC-27 转 染外源性 BART19-3p 模拟物后，WIF1 表达进一步下调，β-catenin 水平升高，细胞 增殖率增加。④EBV 阳性细胞 GT38 转染外源性 BART19-3p 抑制物后，WIF1 表达 水平升高，β-catenin 表达水平下调，细胞生长抑制率增加。结论 ①EBV 阴性和阳性细胞系中 WIF1 表达水平均较低，EBV 阳性细胞系中 表达缺失或下调情况更为明显，去甲基化试剂 5-Aza-CdR 处理可不同程度上调 GT38 及 HGC-27 细胞系 WIF1 表达，EBV 阴性细胞系 HGC-27 上调更为明显。②外源性 BART19-3p 模拟物转染 EBV 阴性细胞系 HGC-27 可进一步抑制 WIF1 表达，抑制 β-Catenin 降解，促进其积聚。提示 BART19-3p 可拮抗 WIF1 对 Wnt/β-catenin 信号 通 路 的 抑 制 作 用 ， 进 而 在 EBV 相 关 肿 瘤 的 发 生 发 展 中 发 挥 作 用 。 ③ 外源性 BART19-3p 抑制物转染 EBV 阳性细胞系 GT38 可抑制 EBV 编码的 BART19-3p 的作1用，WIF1 表达上调，从而抑制 β-catenin 的积聚，进一步证明 BART19-3p 对 WIF1的抑制作用。④尽管普遍认为 EBV 对宿主表观遗传学的影响主要为抑癌基因启动子 区甲基化，但就 WIF1 而言，其编码 miRNAs 可能发挥主要作用。硕士研究生：赵真真(病原生物学) 指导教师：罗兵 教授关键词：Wnt 通路抑制因子 1；EB 病毒；微小 RNA；甲基化；胃癌2The effect of EBV on WIF1 gene methylation and expression in gastric carcinomaAbstractEpstein-Barr (EBV) is an important DNA tumor virus. EBV-associated gastric carcinoma (EBVaGC) comprises up to 10% of total gastric carcinoma cases. DNA methylation and microRNA (miRNA) are the most stu