胶质瘤基因课件.pptVIP

胶质瘤基因治疗的发展和现状北京三博脑科医院胶质瘤病友群249158778 肿瘤基因治疗的实验研究始于80年代末。随着分子生物学技术的进步和肿瘤发病机制研究的深入基因治疗越来越受到重视，用于治疗肿瘤的基因靶点主要有: 组织相容性抗原,如HLA - B7 治疗直肠癌; 肿瘤抑制基因,如P16 治疗肺癌; 细胞因子,如用IL - 2治疗转移性的乳腺癌等。 同时对以病毒为载体转导自杀基因治疗神经胶质细胞瘤的研究拉开了胶质瘤基因治疗的序幕。 自从1992年,美国NIH批准第1个运用反转录病毒介导HSV2tk/ GCV 系统治疗脑胶质瘤的临床方案,全球掀起了肿瘤基因治疗的热潮。 这一时期，一些学者对抑瘤机制和基因的研究也取得一定的成果。如：自杀基因治疗、免疫基因治疗、抑癌基因治疗、抑制血管生成的基因治疗。 自杀基因 ：将它们转导至哺乳动物的细胞后，其表达产物将原先对细胞无毒或相对低毒的物质转变为细胞毒性物质，这种导致细胞“自杀”的基因称为“自杀基因”。目前研究最为广泛的是单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV-TK)基因以及肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD) 。 1992年,美国NIH小组Culver和Ram等把单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-TK)基因导入逆转录病毒载体让其在“包装细胞”中复制包装，以产生具有感染性病毒粒子，将其注入胶质瘤内，再给予GCV，取得了一定效果。 1994年Mullen等把CD基因转染瘤细胞随后给予5—Fc，从而杀伤肿瘤细胞。 1996年—2002年上海市神经外科研究所联合上海长征医院报告25例脑胶质细胞瘤用含单纯疮疹病毒胸昔激酶基因的逆转录病毒载体生产细胞(pLTKcSN/VPC)注人和经甲基无环鸟昔(GCV) 全身给药治疗脑胶质瘤2一5年随访观察( 失访1 例) 的结果。结果证实脑胶质瘤基因治疗的近期疗效要优于常规治疗疗效。 免疫基因治疗：包括将具有免疫刺激作用的细胞因子基因如白细胞介素类(IL-2、IL-4、IL-6、IL-7)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF-α)粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等直接注入肿瘤内或体外转导入TIL或LAK细胞,通过抗肿瘤活性物质的表达增强其杀瘤作用。 1995年Sobol等应用反转录病毒载体将IL-2基因导入病人自身的胶质瘤细胞，此种培养细胞在经放射线照射后作为肿瘤疫苗反复接种于病人自身皮下，此种方案得到RAC（recombinant DNA advisory committee）的批准，结果病人经过10 次疫苗接种后，4个月后复查MRI，可观察到肿瘤明显缩小，末梢血中可查到CD8+T 淋巴细胞。 Bozik等提出将IL-4基因导入自身肿瘤细胞的治疗方案。 抑癌基因治疗:原癌基因和抑癌基因都是正常细胞内存在的基因,它们在细胞的生长、分裂、分化和增殖中起着重要的作用。抑癌基因亦称为抗癌基因,是指正常细胞内存在的能抑制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群。目前p53 基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,不少研究也证明肿瘤的生成会伴随p53 的缺失。近几年对于p53的研究也非常热门。 1994年Fujiqara等用逆转录病毒载体把野生型和突变型P53基因在体外转染胶质瘤细胞发现野生型P53能抑制瘤细胞生长 。 1997年Sandig 等利用腺病毒作载体同时转染p16 和p53 基因,对人肝细胞癌裸鼠动物模型进行基因治疗,结果能明显抑制肿瘤的生长。 抑制血管生成的基因治疗:新生血管生成在实体肿瘤发展中的重要作用已被人们认识, 促血管生成因素与血管生成抑制物之间的平衡是新生血管是否形成的决定因素, 向肿瘤细胞转染血管生成抑制因子基因, 增加其在肿瘤局部的表达, 有利于使这种平衡向抑制血管生成的方面倾斜, 达到抑制肿瘤生长的目的。 用逆转录病毒或腺病毒转染血小板因子4（PF4） cDNA 后, 胶质瘤的内皮细胞DNA 合成降低40% 以上, 肿瘤血管减少, 生长受到抑制。 1999年Im 等利用腺病毒载体将血管内皮生长因子（VEGF） cDNA 分子转染到胶质瘤细胞中,重组腺病毒载体Ad5CMV2alpha VEGF 携带野生型VEGF 165 cDNA 反义编码序列,恶性胶质瘤细胞被其感染后,检测到内源性VEGF mRNA 明显减少,相应的VEGF 蛋白也明显减少。将Ad5 CMV2alpha VEGF 注入到荷胶质瘤裸鼠体表的肿瘤中,明显抑制肿瘤的生长。 在此期间，病毒方法是应用最广的基因转移方法，常用的病毒载体有反转录病毒（RV）、腺病毒（AV）、腺病毒相关病毒（AVV）、单纯疱疹病毒（HSV）等 1998 年，日本学者夏日与美国学者合作，将腺病毒相关病毒AVV包装起来进行脑肿瘤动物模型基因治疗，获得显著效果AVV表达稳定性好，病毒无病原