呼吸道感染患者外周血中肺炎嗜衣原体的检测与研究word格式论文.docxVIP

主要缩略语英文索引缩略语AA/aa全称Amino acid中文名称氨基酸bpBasepair碱基对DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸CpnChlamydophila pneumoniae肺炎嗜衣原体CtChlamydia trachomatis沙眼衣原体dNTPDeoxyn deoside triphosphate脱氧三磷酸核苷酸RNARibonucleic acid核糖核酸EBEthidium bromide溴化乙啶EDTAEthylenediamietetraacetic acid乙二胺四乙酸ELISAEnzymelinked immunosorbent assay酶联免疫吸附试验RNaseRibonuclease核糖核酸酶KD/kDaKilodalton千道尔顿PBSPHosopHate buffered saline磷酸盐缓冲液PCRPolymerase chain reaction聚合酶链反应TBSTris-buffered SalineTris 缓冲盐溶液TBSTTween20/Tris-buffered Saline吐温20/Tris 缓冲盐溶液ODOptical density光密度HRPHorseradish peroxidase辣根过氧化物酶rpmRevolutions per minute每分钟转数LBLria-bertain mediumLB 培养基MrNCMolecularweightNitrocellulose分子量硝酸纤维素膜COPDChronic abstractivepulmonarydisease慢性阻塞性肺疾病WBCWhiteblood cell白细胞RBCRedblood cell红细胞呼吸道感染患者外周血中肺炎嗜衣原体的检测与分析硕士研究生：吴华导师：吴移谋教授中文摘要目的：应用PCR法和ELISA法分别检测呼吸道感染患者PBMC和RBC中的CpnDNA及血清中Cpn-IgG，以了解本地区Cpn的感染率；并结合呼吸道感染患者病史及其他临床资料，分析在呼吸道疾病中Cpn感染的重要性，为监测该病原体的流行及进一步研究其预防措施提供一定的参考。方法：收集173名呼吸道感染患者和52名健康体检者外周血标本，分离PBMC、血清和红细胞。用基因组DNA提取试剂盒提取纯化PBMC和RBC中的DNA，以该DNA为模板，用特异性引物体外PCR扩增Cpn 16S rRNA 和MOMP 基因。扩增产物按照标准方法在1.5%琼脂糖凝胶中电泳鉴定，并对产物DNA进行测序，并与Genebank 中登录的CpnAR-39 序列进行BLAST 比较，以进一步确认扩增产物为Cpn 特异性基因。用ELISA 诊断试剂盒（SavyonDiagnostics）检测待测血清中的Cpn-IgG抗体。通过PCR与ELISA 的检测结果，结合临床资料进行综合分析。结果：以PBMC DNA提取物为模板，呼吸道感染组中Cpn MOMP阳性率为32.40%（56/173），16SrRNA阳性率为33.52%（58/173）；在对照组52 人中，5 人MOMP 和16SrRNA 扩增阳性，阳性率为9.62%；经测序比对：MOMP 扩增产物与CpnAR-39的MOMP基因99%一致；16S rRNA扩增产物与AR-39的16S rRNA基因97%一致。在所有的RBC DNA样本中均未检出Cpn 基因。ELISA 检测血清Cpn-IgG，感染组阳性率50.87%（88/173），对照组阳性率为30.77%（16/52）。血清Cpn-IgG抗体检测及16SrRNA和MOMPPCR扩增结果均显示呼吸道感染组Cpn 感染阳性指标均显著高于健康对照组。ELISA、16SrRNAPCR及MOMPPCR三种方法检测Cpn 感染指标在各年龄组的阳性率分别为：18～40岁年龄组40.00%（14/35）、22.86%（8/35）和17.14%（6/35）；41～60 岁年龄组27.78%（10/36）、13.89%（5/36）和13.89%（5/36）；61～79岁年龄组60.24%（50/83）、48.19%（40/83）和48.19%（40/83）；80 岁以上年龄组73.68%（14/19）、26.32%（5/19）和26.32%（5/19）。根据各组的阳性率可以看出，老年人的Cpn感染率最高。3 例PCR阳性的呼吸道感染患者Cpn-IgG检测为阴性；同样35 例Cpn-IgG 阳性的患者，35 例16S rRNAPCR阴性，33 例MOMP 阴性；而两种Cpn 特异性基因的PCR检测结果高度一致。在临床常见的呼吸道疾病中，以COPD患者的Cpn感染指标检处率最高，提示Cpn感染可能是COPD发生发展的一个重要原因。结论：1）PC