基于卵泡雌激素受体——fshr多肽避孕疫苗的优化设计及其抗生育效应的实验研究-optimal design of fshr polypeptide contraceptive vaccine based on follicular estrogen receptor and experimental study on its antifertility effect.docxVIP

基于卵泡雌激素受体---FSHR多肽避孕疫苗的优化设计及其抗生育效应的实验研究摘要FSH 是垂体分泌的糖蛋白激素，对雄性精子的产生有至关重要的作用。实验表明 阻断 FSH 或受体活性可以引起少精或无精。人们利用 FSH 这种生物学功能结合免疫 学的理论和方法研究开发 FSH/FSHR 避孕疫苗。就 FSHR 避孕疫苗而言，其是通过受 体抗体结合间接封闭 FSH 的生物学功能，抑制精子的生成达到避孕的目的。FSHR 是 G 蛋白偶联受体,有 669 氨基酸组成，其胞外区是与 FSH 结合的关键部位。为避免与 其它糖蛋白家族发生交叉反应而干扰其它激素的功能，因此对 FSHR 活性的表位筛选 具有重要意义。研究发现通过克隆技术表达的 FSHR N 端多肽 (18～27、 25～34、 29～38 氨基酸 )可以避孕，而且生育力在停止免疫后逐渐恢复。以上研究无疑为避孕 疫苗的研究带来了曙光。但也仍存在一些问题，如所应用的研究对象数目少，不具有 代表性，生育力恢复实验仅为 33.4%，其对生殖健康的远期影响尚需进一步的验证等。 本实验室前期工作中用人 FSHR 重组蛋白免疫雄性小鼠后，导致小鼠受孕率明显下降。 但一个严重的问题是带来生殖器管的损伤及睾酮的下降。考虑到 FSHR 蛋白免疫动物 造成生殖器官损伤主要是因为蛋白表面含有多种表位，除中和表位外，其它表位如毒 性表位、优势非中和性表位等可能引起免疫偏移造成免疫损伤，因此为了减少其副作 用，我们利用计算机联合预测结合人工合成的方法获得关于 FSHR 蛋白胞外区由 13 氨基酸组成的多肽，并采用不同剂量多肽初免、加强策略免疫雄鼠，观察其避孕效应 及对生殖机能的影响，主要内容包括：1.利用各种生物信息学方法对 FSHR 胞外区蛋 白进行二维结构分析、对 B 细胞表位筛选以及通过分子对接等综合预测，获得优势中 和表位肽段，并对获得的肽段进行优化。并通过肽结合实验进一步验证筛选肽段的免 疫原性，获得最终优化后 B 细胞表位多肽。2.使用不同剂量的 FHSR 多肽免疫雄性小 鼠，在不同的免疫时期与正常受孕的雌鼠合笼（比例 1:2）观察雌鼠受孕率及产仔率。 3.在观察不同剂量 FSHR 肽段对小鼠避孕效果同时，检测被免疫小鼠的生殖器官有无 病理损害、了解被免疫小鼠的精子功能，以及性激素水平。主要采用的实验方法如下：1.采用 DNAprotein 软件对 FSHR 蛋白胞外区二级结构Analysis of B-cell epitope of FSHR and study on its anti-fertility potential in adult male miceAbstractObjective Follicle-stimulating hormone (FSH) is a pituitary glycoprotein hormone required for normal spermatogenesis in males. Studies have shown that blocking FSH activity can decrease sperm counts. FSH acts through its receptor (FSHR) which expresses exclusively on the membranes of Sertoli cells of testis to regulate spermatogenesis. Moreover, the extracellular domain (ECD) of its receptor is believed to be responsible for important specific hormone-receptor contact sites. Making use of the function of FSH blocking spermatogenesis, some researchers conducted survey using peptides of the ECD of FSHR and found that infertility can be induced in different species. Priming with human recombinant FSHR protein (F140) and boosting with FSHR 32-44 amino acids peptide showed specific immune response and fertility inhibition in adult male mice in our previous study.