高三生物《血红蛋白的提取与分离2》（课件）.pptVIP

2）凝胶色谱柱填料的处理 计算凝胶量 配置凝胶悬浮液 装填 洗涤平衡 　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意 装配好的凝胶柱 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 思考 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 　　使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。 思考 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 3）样品加入与洗脱 50cm高 3）样品加入与洗脱 ①缓冲液缓慢下降 50cm高 ②加透析样品 注意正确的加样操作： ①不要触及破坏凝胶面 ②贴壁加样 ③使吸管管口沿管壁环绕移动 注 意 3）样品加入与洗脱 ①缓冲液缓慢下降 50cm