生物选修一精华复习总结版.docxVIP

微生物培养基1.1成分培养基的化学成分包括 水、无机盐、碳源、氮源、生长因子1.1.1碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源（自养）；糖类、石油、生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。1.1.2氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。1.1.3培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件1.2 分类1.2.1按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基1.2.2按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。（如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌，利用伊红-美蓝培养基鉴别大肠杆菌）1.2.3人工合成培养基和天然培养基1.3 制备牛肉膏蛋白胨培养基1.3.1配方 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂1.3.2操作 计算，称量，融化，灭菌，倒平板①称量时，牛肉膏蛋白胨都易吸潮，称量要迅速②融化加琼脂时要不断搅拌，防止脂糊底而导致烧杯破裂③灭菌时，装有培养基的锥形瓶要用高压蒸汽灭菌法，培养皿要用干热灭菌法④平板冷凝后需要倒置，，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上冷凝的水珠落入培养基,造成污染。（微生物培养的时候也需要倒置，另一个原因：由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质，利于微生物生长。）2 灭菌与消毒2.1消毒 较为温和的理化方法，仅杀死物体表面或内部的部分有害微生物。包括：煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂消毒（如酒精、氯气、石炭酸等）、紫外线消毒法2.2强烈理化因素，杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。包括：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。2.3 灭菌①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（防止x的微生物污染培养基）②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； ③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。3 纯化微生物的接种方法3.1平板划线法（适用好氧菌）和稀释涂布平板法（适用好氧菌以及兼性厌氧菌）。3.2平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。3.2.1操作的第一步以、每次划线之前、划线操作结束时均需要灼烧接种环的目的操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。3.2.3在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种3.2.4 最后一区不能与第一区相连，划线力度要适中。3.3稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。3.4用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。4统计菌落数目4.1测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。4.2释涂布平板法统计（可以区分活死菌）4.2.1为了保证结果准确，一般设置3～2个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。4.2.2每克样品中的菌落数=（C/V）*M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数4.3显微镜直接计数法统计（不能区分活死菌）利用特定的细菌计数板或者血细胞计数板2 土壤中分解尿素与纤维素的细菌的分离2.1 原理 2.1.1细菌之所以能分解尿素CO(NH2)2，是因为他们能合成脲酶,将尿素分解为CO2,NH32.1.2土壤中的细菌之所以能分解纤维素，是因为他们能合成纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种